| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 中文文摘 | 第5-10页 |
| 绪论 | 第10-26页 |
| 第一节 细菌表面展示技术 | 第10-15页 |
| 1.1 细菌表面展示技术简介 | 第10页 |
| 1.2 细菌表面展示技术的组成和分类 | 第10-14页 |
| 1.3 细菌表面展示技术的应用 | 第14-15页 |
| 第二节 自转运蛋白的研究进展 | 第15-21页 |
| 2.1 自转运蛋白的结构 | 第16-17页 |
| 2.2 自转运蛋白的分泌机制 | 第17-19页 |
| 2.3 利用AT构建表面展示系统 | 第19-21页 |
| 第三节 Burkholderia sp.脂肪酶LipA研究进展 | 第21-24页 |
| 3.1 Burkholderia sp.脂肪酶LipA的结构 | 第21-22页 |
| 3.2 Burkholderia sp.脂肪酶的折叠及其分泌机制 | 第22-23页 |
| 3.3 Burkholderia sp.脂肪酶的应用 | 第23-24页 |
| 第四节 本课题的研究目的及意义 | 第24-26页 |
| 第一章 基于EstA构建Burkholderia sp.脂肪酶LipA的大肠杆菌表面展示系统 | 第26-60页 |
| 第一节 实验材料 | 第27-31页 |
| 1.1 菌株、质粒及使用的引物 | 第27-29页 |
| 1.2 培养基及主要试剂 | 第29-30页 |
| 1.3 主要仪器和设备 | 第30-31页 |
| 第二节 实验方法 | 第31-46页 |
| 2.1 基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 2.2 全长estA在大肠杆菌中的表达 | 第31-33页 |
| 2.3 基于胞内表达lipB的脂肪酶表面展示系统 | 第33-36页 |
| 2.4 构建基于周质空间表达lipB的脂肪酶表面展示系统 | 第36-38页 |
| 2.5 LipA和LipB共展示载体pACYC-C5的构建 | 第38-46页 |
| 第三节 实验结果 | 第46-58页 |
| 3.1 提取P.aeruginosa AFU01和B.cepacia ZYB002基因组DNA | 第46-47页 |
| 3.2 全长的estA在大肠杆菌中的表达 | 第47-48页 |
| 3.3 基于胞内表达lipB的脂肪酶表面展示系统的构建 | 第48-50页 |
| 3.4 基于周质空间表达lipB的脂肪酶表面展示系统的构建 | 第50-52页 |
| 3.5 共展示LipA和LipB展示系统的构建 | 第52-58页 |
| 第四节 结论与讨论 | 第58-60页 |
| 4.1 结论 | 第58-59页 |
| 4.2 讨论 | 第59-60页 |
| 第二章 EstA作为载体蛋白展示外源蛋白能力的探究 | 第60-78页 |
| 第一节 实验材料 | 第60-62页 |
| 1.1 菌株、质粒使用的引物 | 第60-62页 |
| 1.2 培养基及主要试剂的配制 | 第62页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第62页 |
| 第二节 实验方法 | 第62-70页 |
| 2.1 EstA结构的可视化分析及外源蛋白融合位点的选择 | 第62-63页 |
| 2.2 不同EstA融合位点的脂肪酶表面展示载体的构建 | 第63-65页 |
| 2.3 EstA不同融合位点的脂肪酶展示效率的比较 | 第65-66页 |
| 2.4 利用EstA展示eGFP的研究 | 第66-70页 |
| 2.5 利用G_4S linker提高eGFP的表面展示效率 | 第70页 |
| 第三节 实验结果 | 第70-76页 |
| 3.1 EstA结构的可视化分析及外源蛋白融合位点的选择 | 第70-71页 |
| 3.2 不同长度EstA表面展示载体的构建 | 第71-72页 |
| 3.3 EstA不同融合位点的脂肪酶展示效率的比较 | 第72-73页 |
| 3.4 利用EstA展示eGFP的研究 | 第73-75页 |
| 3.5 利用G_4S linker来帮助eGFP的表面展示 | 第75-76页 |
| 第四节 结论与讨论 | 第76-78页 |
| 4.1 结论 | 第76页 |
| 4.2 讨论 | 第76-78页 |
| 第三章 其他AT表面展示能力的探究 | 第78-94页 |
| 第一节 实验材料 | 第78-80页 |
| 1.1 菌株、质粒及使用的引物 | 第78-80页 |
| 1.2 培养基及主要试剂的配制 | 第80页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第80页 |
| 第二节 实验方法 | 第80-85页 |
| 2.1 几种AT结构的比较及融合位点的选择 | 第80页 |
| 2.2 构建不同自转运表面展示载体 | 第80-83页 |
| 2.3 利用EspP(D1120N)表面展示eGFP | 第83-84页 |
| 2.4 全细胞免疫荧光显微分析 | 第84-85页 |
| 第三节 实验结果 | 第85-91页 |
| 3.1 几种AT结构的比较及融合位点的选择 | 第85-86页 |
| 3.2 构建不同自转运表面展示载体 | 第86-89页 |
| 3.3 利用EspP(D1120N)表面展示eGFP | 第89-90页 |
| 3.4 全细胞免疫荧光显微分析 | 第90-91页 |
| 第四节 结论与讨论 | 第91-94页 |
| 4.1 结论 | 第91页 |
| 4.2 讨论 | 第91-94页 |
| 第四章 结论与展望 | 第94-96页 |
| 4.1 结论 | 第94页 |
| 4.2 展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 个人简历 | 第109-111页 |
