| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 縮略语表 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 木质纤维素 | 第13-17页 |
| 1.1.1 纤维素及其降解酶 | 第13-14页 |
| 1.1.2 半纤维素及半纤维素酶 | 第14-15页 |
| 1.1.3 木质素及木质素酶 | 第15-17页 |
| 1.2 白蚁参与木质纤维素的降解 | 第17-20页 |
| 1.2.1 白蚁的简介 | 第17页 |
| 1.2.2 白蚁的肠道结构 | 第17-19页 |
| 1.2.3 白蚁肠道的水解酶 | 第19-20页 |
| 1.3 昆虫的转录组测序 | 第20-21页 |
| 1.4 漆酶 | 第21-23页 |
| 1.4.1 漆酶的简介 | 第21-22页 |
| 1.4.2 昆虫漆酶的基本特征 | 第22页 |
| 1.4.3 昆虫漆酶参与木质素的降解或食物脱毒 | 第22-23页 |
| 1.5 β-葡萄糖苷酶 | 第23页 |
| 1.6 过氧化物酶与阿魏酸酯酶 | 第23-25页 |
| 1.6.1 过氧化物酶 | 第23-24页 |
| 1.6.2 阿魏酸酯酶 | 第24-25页 |
| 1.7 本文的立题依据和基本思路 | 第25-27页 |
| 1.7.1 立题依据 | 第25页 |
| 1.7.2 基本思路 | 第25-27页 |
| 第二章 黄翅大白蚁中肠漆酶的来源分析及昆虫杆状病毒表达 | 第27-41页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料、试剂及仪器 | 第27页 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 | 第27页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第27页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第27-32页 |
| 2.3.1 漆酶基因组序列扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.2 染色体步移法扩增漆酶基因的上下游序列 | 第28页 |
| 2.3.3 构建昆虫杆状病毒表达系统并表达漆酶 | 第28-32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-38页 |
| 2.4.1 漆酶基因组序列分析 | 第32-33页 |
| 2.4.2 漆酶来源分析 | 第33-34页 |
| 2.4.3 昆虫杆状病毒表达系统表达漆酶 | 第34-36页 |
| 2.4.4 昆虫杆状病毒表达表达系统的优化与蛋白表达验证 | 第36-38页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第38-41页 |
| 第三章 黄翅大白蚁中肠来源的β-葡萄糖苷酶cDNA的扩增与表达分析 | 第41-65页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料、仪器与试剂 | 第41-42页 |
| 3.2.1 白蚁样品 | 第41页 |
| 3.2.2 菌株与质粒 | 第41-42页 |
| 3.2.3 试剂与仪器设备 | 第42页 |
| 3.3 实验方法与步骤 | 第42-49页 |
| 3.3.1 黄翅大白蚁中肠总RNA的提取、纯化与验证 | 第42页 |
| 3.3.2 合成cDNA第一链 | 第42页 |
| 3.3.3 β-葡萄糖苷酶(10810、59997、10737)全长cDNA序列的克隆 | 第42-43页 |
| 3.3.4 序列拼接与分析 | 第43-44页 |
| 3.3.5 重组载体的构建与在大肠杆菌BL21/JM109(DE3)中表达 | 第44-46页 |
| 3.3.6 毕赤酵母GS115菌株中表达 | 第46-47页 |
| 3.3.7 优化的序列在大肠杆菌BL21(DE3)-RIL中表达 | 第47-48页 |
| 3.3.8 载体构建和昆虫杆状病毒表达系统表达 | 第48-49页 |
| 3.4 实验结果 | 第49-62页 |
| 3.4.1 黄翅大白蚁中肠总RNA的提取、纯化与验证 | 第49页 |
| 3.4.2 β-葡萄糖苷酶-10810、59997、10737全长cDNA序列的克隆 | 第49-56页 |
| 3.4.3 BG-10810、59997、10737在大肠杆菌BL21/JM109(DE3)菌株中的表达 | 第56-60页 |
| 3.4.4 pPICZαA-10810、59997、10737在GS115中的诱导表达 | 第60-61页 |
| 3.4.5 β-葡萄糖苷酶-MbBG、10737、59997、10810在昆虫杆状病毒表达系统中表达 | 第61-62页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第62-65页 |
| 第四章 转录组测序来源的过氧化物酶基因的扩增与序列分析 | 第65-71页 |
| 4.1 引言 | 第65页 |
| 4.2 实验材料、仪器与试剂 | 第65页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第65页 |
| 4.2.2 实验仪器与试剂 | 第65页 |
| 4.3 实验方法与步骤 | 第65-66页 |
| 4.3.1 过氧化物酶全长cDNA序列的扩增 | 第65页 |
| 4.3.2 过氧化物酶全长cDNA序列的拼接与分析 | 第65-66页 |
| 4.4 实验结果 | 第66-69页 |
| 4.4.1 过氧化物酶全长cDNA序列的克隆 | 第66页 |
| 4.4.2 过氧化物酶全长cDNA序列的拼接、扩增与分析 | 第66-69页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 转录组测序来源的阿魏酸酯酶基因的扩增与序列分析 | 第71-77页 |
| 5.1 引言 | 第71页 |
| 5.2 实验材料、仪器与试剂 | 第71页 |
| 5.3 实验方法与步骤 | 第71页 |
| 5.3.1 阿魏酸酯酶基因全长cDNA序列的克隆 | 第71页 |
| 5.3.2 阿魏酸酯酶基因全长cDNA序列的拼接与分析 | 第71页 |
| 5.4 实验结果 | 第71-74页 |
| 5.4.1 阿魏酸酯酶基因全长cDNA序列的克隆 | 第71-72页 |
| 5.4.2 阿魏酸酯酶82227基因全长cDNA序列的拼接与扩增 | 第72-73页 |
| 5.4.3 82227蛋白序列分析 | 第73-74页 |
| 5.5 小结与讨论 | 第74-77页 |
| 第六章 总结与展望 | 第77-79页 |
| 附录 | 第79-97页 |
| 附录一 染色体步移(Genome walking)实验步骤 | 第79-82页 |
| 附录二 大肠杆菌DH10Bac感受态细胞的制备 | 第82-84页 |
| 附录三 SMARTer RACE cDNA Amplification Kit步骤 | 第84-87页 |
| 附录四 阿魏酸酯酶82227,过氧化物酶75774 RACE扩增及全长序列扩增引物 | 第87-88页 |
| 附录五 Western blot的步骤 | 第88-90页 |
| 附录六 黄翅大白蚁头部DNA的提取方法 | 第90-91页 |
| 附录七 检测用底物的配制置方法 | 第91-92页 |
| 附录八 黄翅大白蚁中肠总RNA的提取、纯化与检测 | 第92-93页 |
| 附录九 本文所涉及的培养基 | 第93-95页 |
| 附录十 毕赤酵母Pichia pastoris GS115感受态细胞的制备以及电转化的方法 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-103页 |
| 致谢 | 第103-105页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与参加的学术会议 | 第105-106页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第106页 |
