| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-29页 |
| 1.1 纤维素的结构 | 第15-17页 |
| 1.2 纤维素生物降解的策略 | 第17-21页 |
| 1.2.1 游离纤维素酶协同降解机制 | 第17-18页 |
| 1.2.2 纤维小体降解机制 | 第18-19页 |
| 1.2.3 第三种纤维素降解机制 | 第19-21页 |
| 1.3 细菌的滑动 | 第21-24页 |
| 1.3.1 黄色粘球菌(Myxococcus xanthus)的滑动 | 第22-23页 |
| 1.3.2 约氏黄杆菌(Flavobacterium johnsoniae)的滑动 | 第23-24页 |
| 1.4 Cytophaga hutchinsonii的特征及研究进展 | 第24-28页 |
| 1.4.1 Cytophaga hutchinsonii的特征 | 第24-25页 |
| 1.4.2 Cytophaga hutchinsonii的研究进展 | 第25-28页 |
| 1.5 论文的立题依据及工作内容 | 第28-29页 |
| 第二章 Cytophaga hutchinsonii纤维素利用缺陷突变株MT1-5的筛选与鉴定 | 第29-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第29-35页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第29页 |
| 2.1.2 引物 | 第29-30页 |
| 2.1.3 培养基 | 第30-31页 |
| 2.1.4 主要试剂及仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.5 常规分子生物学方法及反应体系 | 第32页 |
| 2.1.6 接合转化 | 第32页 |
| 2.1.7 电转化 | 第32-33页 |
| 2.1.8 纤维素利用缺陷菌株的筛选 | 第33页 |
| 2.1.9 MT1-5的转座子插入位置的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.1.10 MT1-5的Southern blot验证 | 第34页 |
| 2.1.11 Spp1的RT-PCR以及spp1的插入是否引起极性效应的验证 | 第34页 |
| 2.1.12 chu_2981的序列分析 | 第34-35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-42页 |
| 2.2.1 Cytophaga hutchinsonii转化方法的确定 | 第35-36页 |
| 2.2.2 纤维素利用缺陷菌株的筛选 | 第36-37页 |
| 2.2.3 纤维素利用缺陷菌株MT1-5的转座子插入位置的鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.4 纤维素利用缺陷菌株MT1-5的Southern blot验证 | 第38-39页 |
| 2.2.5 spp1的转录验证及极性效应的验证 | 第39-41页 |
| 2.2.6 chu_2981的序列分析 | 第41-42页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 Cytophaga hutchinsonii纤维素利用缺陷型突变株MT1-5的性质研究 | 第44-82页 |
| 3.1 材料方法 | 第44-57页 |
| 3.1.1 菌种及质粒 | 第44页 |
| 3.1.2 引物 | 第44-49页 |
| 3.1.3 培养基 | 第49页 |
| 3.1.4 主要试剂及仪器 | 第49页 |
| 3.1.5 纤维素利用缺陷突变株MT1-5生长的测定 | 第49-50页 |
| 3.1.6 纤维素利用缺陷突变株MT1-5的纤维素酶活测定 | 第50-51页 |
| 3.1.7 纤维素利用缺陷突变株MT1-5对纤维素吸附的测定 | 第51-53页 |
| 3.1.8 突变株MT1-5在软琼脂表面的扩散以及菌体的运动观察 | 第53-54页 |
| 3.1.9 突变株MT1-5的基因回补 | 第54页 |
| 3.1.10 蛋白Spp1在细胞中的定位分析 | 第54-57页 |
| 3.2 结果与分析 | 第57-81页 |
| 3.2.1 纤维素利用缺陷突变株MT1-5生长性质的分析 | 第57-58页 |
| 3.2.2 纤维素利用缺陷突变株MT1-5的纤维素酶活分析 | 第58-60页 |
| 3.2.3 纤维素利用缺陷突变株MT1-5对结晶纤维素吸附的分析 | 第60-61页 |
| 3.2.4 纤维素利用缺陷突变株MT-5的运动性分析 | 第61-65页 |
| 3.2.5 突变株MT1-5的基因功能的回补 | 第65-72页 |
| 3.2.6 Spp1在细胞中的定位分析 | 第72-81页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第81-82页 |
| 第四章 Spp1的重组表达与体外功能的研究 | 第82-94页 |
| 4.1 材料方法 | 第82-86页 |
| 4.1.1 菌种及质粒 | 第82页 |
| 4.1.2 引物 | 第82-83页 |
| 4.1.3 培养基 | 第83页 |
| 4.1.4 主要试剂与仪器 | 第83页 |
| 4.1.5 基因克隆以及重组载体的构建 | 第83-84页 |
| 4.1.6 Spp1的异源表达 | 第84页 |
| 4.1.7 重组蛋白的分离纯化 | 第84-85页 |
| 4.1.8 重组蛋白GST-Spp1对于突变株MT1-5的纤维素利用能力的回补 | 第85页 |
| 4.1.9 “pull-down”亲和层析 | 第85-86页 |
| 4.1.10 重组蛋白GST-Spp1对于抑制溶菌酶聚集的测定 | 第86页 |
| 4.1.11 重组蛋白GST-Spp1大小的确定 | 第86页 |
| 4.2 结果与分析 | 第86-92页 |
| 4.2.1 重组表达载体的构建 | 第86-87页 |
| 4.2.2 Spp1的异源表达与纯化 | 第87-89页 |
| 4.2.3 体外条件下GST-Spp1对于菌体利用纤维素能力的回补 | 第89页 |
| 4.2.4 “pull-down”亲和层析 | 第89-91页 |
| 4.2.5 GST-Spp1聚集形式的检测 | 第91-92页 |
| 4.2.6 重组蛋白GST-Spp1对于抑制溶菌酶聚集的测定 | 第92页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第92-94页 |
| 第五章 cbp1(chu_3654)与oppA(chu_3498)基因功能的研究 | 第94-110页 |
| 5.1 材料方法 | 第94-97页 |
| 5.1.1 菌种及质粒 | 第94页 |
| 5.1.2 引物 | 第94-95页 |
| 5.1.3 培养基 | 第95页 |
| 5.1.4 主要试剂与仪器 | 第95-96页 |
| 5.1.5 基因克隆以及单插入失活载体的构建 | 第96页 |
| 5.1.6 cbp1(chu_3654)与oppA(chu_3498)基因的单插入失活 | 第96页 |
| 5.1.7 插入失活突变株⊿cbp1与⊿oppA的验证 | 第96-97页 |
| 5.1.8 插入失活突变株⊿cbp1与⊿oppA生长特性的测定 | 第97页 |
| 5.1.9 插入失活突变株⊿cbp1与纤维素吸附的测定 | 第97页 |
| 5.2 结果分析 | 第97-108页 |
| 5.2.1 cbp1(chu_3654)与oppA(chu_3498)基因的生物信息学分析 | 第97-99页 |
| 5.2.2 cbp1(chu_3654)与oppA(chu_3498)单插入失活载体的构建 | 第99-100页 |
| 5.2.3 cpb1(chu_3654)与oppA(chu_3498)基因单插入失活 | 第100-101页 |
| 5.2.4 插入失活突变株⊿cbp1与⊿oppA的验证 | 第101-105页 |
| 5.2.5 插入失活突变株⊿cbp1与⊿oppA的生长特性的分析 | 第105-107页 |
| 5.2.6 插入失活突变株⊿cbp1与纤维素吸附的分析 | 第107-108页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第108-110页 |
| 全文总结与展望 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第122页 |
