| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 鸡卵巢和卵泡 | 第12-13页 |
| 1.2 miRNA的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 miRNA发现及加工过程 | 第13-14页 |
| 1.2.2 miRNA作用机制与功能 | 第14-15页 |
| 1.2.3 miRNA在卵巢上的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.4 miRNA的SNP研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.5 miR-1b-3p研究进展 | 第17页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 试验动物与样品采集 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器及厂商 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要试剂及来源 | 第20页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.1.5 主要生物学应用网站及软件 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-36页 |
| 2.2.1 鸡卵泡颗粒细胞和膜细胞的分离培养 | 第21-22页 |
| 2.2.2 RNA提取与检测 | 第22-24页 |
| 2.2.2.1 鸡下丘脑组织RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2.2 膜细胞和颗粒细胞RNA提取 | 第23页 |
| 2.2.2.3 RNA浓度和质量检测 | 第23-24页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR检测 | 第24-26页 |
| 2.2.3.1 反转录获得cDNA | 第24页 |
| 2.2.3.2 荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR) | 第24-26页 |
| 2.2.4 miR-1b-3p启动子区SNPs位点鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.5 miR-1b-3p启动子区载体的构建 | 第28-33页 |
| 2.2.5.1 miR-1b-3p启动子区扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.5.2 PCR产物回收 | 第29-30页 |
| 2.2.5.3 连接转化 | 第30页 |
| 2.2.5.4 质粒DNA提取与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.5.5 重组质粒的酶切验证与测序 | 第31-32页 |
| 2.2.5.6 去内毒素质粒提取 | 第32页 |
| 2.2.5.7 定点突变SNP位点 | 第32-33页 |
| 2.2.6 转录因子结合位点鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.7 Sp1真核表达载体的构建 | 第34页 |
| 2.2.7.1 Sp1基因CDS区的扩增与纯化 | 第34页 |
| 2.2.7.2 PCR产物与pUSE-amp+载体的连接与转化 | 第34页 |
| 2.2.7.3 质粒DNA的提取 | 第34页 |
| 2.2.7.4 重组质粒的酶切验证与测序 | 第34页 |
| 2.2.7.5 去内毒素质粒提取 | 第34页 |
| 2.2.8 mimics(miRNA模拟物)合成 | 第34-35页 |
| 2.2.9 细胞瞬时转染 | 第35页 |
| 2.2.10 双荧光素酶活性检测 | 第35-36页 |
| 2.2.11 CCK-8细胞增殖检测试验 | 第36页 |
| 2.3 数据分析 | 第36-37页 |
| 3 结果分析 | 第37-47页 |
| 3.1 miR-1b-3p在鸡下丘脑及卵泡细胞中的表达 | 第37-40页 |
| 3.1.1 总RNA的提取 | 第37页 |
| 3.1.2 miR-1b-3p在性成熟前后百日鸡下丘脑及卵泡细胞中的表达 | 第37-38页 |
| 3.1.4 候选靶基因KEGG信号通路分析 | 第38-39页 |
| 3.1.5 膜细胞中miR-1b-3p对候选靶基因表达的影响 | 第39-40页 |
| 3.2 miR-1b-3p对等级卵泡膜细胞增殖的影响 | 第40-41页 |
| 3.3 miR-1b-3p启动子区分析 | 第41-47页 |
| 3.3.1 miR-1b-3p启动子区多态位点检测 | 第41页 |
| 3.3.2 SNP对miR-1b-3p启动活性及表达的影响 | 第41-43页 |
| 3.3.3 miR-1b-3p启动子区SNP位点转录因子的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.4 miR-1b-3p启动子区SNP在不同鸡种中的等位基因和基因型频率 | 第44-45页 |
| 3.3.5 miR-1b-3p启动子区SNP位点与产蛋性能关联分析 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及专利 | 第59页 |
