| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 禽流感病毒研究进展 | 第11-24页 |
| ·禽流感概述 | 第11-12页 |
| ·禽流感病毒的一般生物学特性 | 第12-14页 |
| ·AIV 的分类地位 | 第12页 |
| ·AIV 的形态特征 | 第12-13页 |
| ·AIV 的理化特性 | 第13页 |
| ·AIV 的抗原性和基因型变异 | 第13-14页 |
| ·AIV 的生态学与流行病学变化 | 第14页 |
| ·AIV 的分子生物学研究进展 | 第14-19页 |
| ·AIV 的基因组结构 | 第14-15页 |
| ·AIV 基因编码蛋白的结构和功能 | 第15-18页 |
| ·AIV 宿主特异性的分子生物学基础 | 第18-19页 |
| ·AIV 分子生物学检测方法研究进展 | 第19-21页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第19-20页 |
| ·逆转录-环介导等温核酸扩增技术 | 第20-21页 |
| ·基因芯片技术 | 第21页 |
| ·禽流感疫苗研究进展及展望 | 第21-23页 |
| ·禽流感全病毒灭活疫苗 | 第21-22页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第22页 |
| ·基因重组活载体疫苗 | 第22页 |
| ·核酸疫苗 | 第22页 |
| ·具有交叉保护性的通用疫苗 | 第22-23页 |
| ·新型疫苗 | 第23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 H9N2 亚型AIV NS1 基因在大肠杆菌中的表达 | 第24-39页 |
| ·材料 | 第24-28页 |
| ·毒株和鸡胚 | 第24页 |
| ·阳性血清和标准抗原 | 第24页 |
| ·载体及菌种 | 第24页 |
| ·主要试剂及溶液配制 | 第24-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-34页 |
| ·病毒增殖 | 第28页 |
| ·PCR 引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| ·病毒总RNA 的提取 | 第29页 |
| ·NS1 基因的RT-PCR | 第29页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第29-30页 |
| ·PCR 产物与T 载体连接 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·转化 | 第30-31页 |
| ·克隆化质粒的提取及鉴定 | 第31页 |
| ·目的基因与表达载体的连接、转化及鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第32页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第32-33页 |
| ·表达蛋白的western-blotting 分析 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-37页 |
| ·鸡胚接种及病变观察 | 第34页 |
| ·NS1 基因的RT-PCR 扩增 | 第34页 |
| ·NS1 基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·NS1 基因原核重组质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·NS1 基因测序结果分析 | 第35-36页 |
| ·NS1 基因大肠杆菌表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第36页 |
| ·重组质粒pET-NS1 原核表达产物的Western - blotting 分析 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第三章 H9N2 亚型AIV NS1 蛋白在293 细胞中的瞬时表达 | 第39-48页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·病毒 | 第39页 |
| ·载体、菌株和细胞系 | 第39页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第39-40页 |
| ·主要溶液的配制 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-43页 |
| ·引物设计 | 第40-41页 |
| ·病毒总RNA 的提取 | 第41页 |
| ·NS1 基因的RT-PCR 扩增 | 第41页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第41页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T simple 载体连接 | 第41页 |
| ·DH5a 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·连接产物的转化 | 第41页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·AIV NS1 真核重组表达质粒的构建 | 第42页 |
| ·AIV NS1 真核重组表达质粒在细胞中的表达 | 第42-43页 |
| ·pEGFP-C1-NS1 转染293 细胞的Western –blotting 检测 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| ·NS1 基因的RT-PCR 扩增 | 第43-44页 |
| ·NS1 基因的重组质粒PMD-NS1z 构建 | 第44页 |
| ·NS1 基因真核重组表达载体pEGFP -NS1 的构建 | 第44-45页 |
| ·重组质粒转染293 细胞后在荧光显微镜下的照片 | 第45-46页 |
| ·NS1 基因转染293 细胞瞬时表达产物的Western - blotting 分析 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第四章 H9N2 亚型AIV NS1 蛋白对几种细胞凋亡的影响 | 第48-55页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·质粒和细胞系 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| ·转染质粒的提取及其浓度、纯度的检测 | 第48-49页 |
| ·NS1 基因真核重组表达质粒瞬时转染细胞 | 第49页 |
| ·凋亡检测 | 第49-50页 |
| ·结果 | 第50-53页 |
| ·目的质粒转染MDCK 细胞检测结果 | 第50-51页 |
| ·目的质粒转染Vero 细胞检测结果 | 第51-52页 |
| ·目的质粒转染293 细胞检测结果 | 第52-53页 |
| ·目的质粒引起几种细胞凋亡情况分析 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 缩略词表 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
