| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 缩略词 | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-34页 |
| 1.1 鱼类免疫机制的研究概述 | 第16-22页 |
| 1.1.1 鱼类先天性免疫防御机制 | 第17页 |
| 1.1.2 鱼类免疫细胞的种类 | 第17-19页 |
| 1.1.3 呼吸爆发 | 第19-20页 |
| 1.1.4 细胞因子 | 第20-21页 |
| 1.1.5 髓过氧化物酶 | 第21-22页 |
| 1.2 离子通道概述 | 第22-23页 |
| 1.3 钾离子通道概述 | 第23-30页 |
| 1.3.1 钾离子通道的结构 | 第23-25页 |
| 1.3.2 钾离子通道的分类 | 第25-27页 |
| 1.3.3 钾离子通道的阻断剂和激活剂 | 第27-28页 |
| 1.3.4 小电导钙激活型钾离子通道研究进展 | 第28-29页 |
| 1.3.5 钾离子通道在鱼类免疫机制中所起的作用 | 第29-30页 |
| 1.4 本研究的主要内容及意义 | 第30-34页 |
| 第二章 星斑川鲽钾离子通道基因的克隆 | 第34-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第34-37页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第34页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第34页 |
| 2.1.3 钾离子通道基因多对PCR引物设计 | 第34-35页 |
| 2.1.4 星斑川鲽外周血淋巴细胞的制备与计数 | 第35页 |
| 2.1.5 细胞总RNA提取 | 第35页 |
| 2.1.6 逆转录合成第一条cDNA链 | 第35页 |
| 2.1.7 扩增钾离子通道基因核心片段 | 第35-36页 |
| 2.1.8 PCR产物纯化 | 第36页 |
| 2.1.9 目的基因片段的连接转化 | 第36页 |
| 2.1.10 阳性菌株的筛选及测序 | 第36-37页 |
| 2.1.11 测序结果序列拼接及验证 | 第37页 |
| 2.1.12 生物信息学分析 | 第37页 |
| 2.2 结果与分析 | 第37-41页 |
| 2.2.1 淋巴细胞的计数 | 第37-38页 |
| 2.2.2 总RNA的质量 | 第38页 |
| 2.2.3 cDNA质量 | 第38页 |
| 2.2.4 拼接获取部分钾离子通道基因序列 | 第38-40页 |
| 2.2.5 钾离子通道基因片段的生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-43页 |
| 2.4 小结 | 第43-44页 |
| 第三章 星斑川鲽免疫细胞在不同刺激下KCNN2的表达模式 | 第44-56页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 3.1.1 菌株和实验用鱼 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第44页 |
| 3.1.3 星斑川鲽外周血免疫细胞的制备 | 第44-45页 |
| 3.1.4 淋巴细胞和中性粒细胞的鉴定 | 第45页 |
| 3.1.5 淋巴细胞在LPS刺激下的处理 | 第45页 |
| 3.1.6 三种刺激物对中性粒细胞的实验处理 | 第45-46页 |
| 3.1.7 通道激活剂和阻断剂对中性粒细胞的预处理 | 第46页 |
| 3.1.8 基因KCNN2 qRT-PCR引物设计 | 第46页 |
| 3.1.9 细胞总RNA提取 | 第46页 |
| 3.1.10 cDNA合成及质量检测 | 第46页 |
| 3.1.11 星斑川鲽免疫细胞在多种刺激物不同时间KCNN2的表达模式变化 | 第46页 |
| 3.1.12 实验数据处理 | 第46页 |
| 3.2 结果与分析 | 第46-51页 |
| 3.2.1 免疫细胞形态 | 第46-47页 |
| 3.2.2 免疫细胞鉴定结果 | 第47-48页 |
| 3.2.3 免疫细胞cDNA质量 | 第48页 |
| 3.2.4 淋巴细胞KCNN2 mRNA在LPS刺激不同时间的相对表达量变化 | 第48-49页 |
| 3.2.5 中性粒细胞KCNN2 mRNA在LPS、PMA和灭活鳗弧菌刺激不同时间的相对表达量变化 | 第49-50页 |
| 3.2.6 通道激活剂和阻断剂孵育后加入LPS刺激不同时间对KCNN2表达量的影响 | 第50-51页 |
| 3.3 讨论 | 第51-55页 |
| 3.4 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 KCNN2在星斑川鲽免疫细胞中的先天性免疫应答机制 | 第56-72页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-59页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第57页 |
| 4.1.3 星斑川鲽外周血免疫细胞的制备及鉴定 | 第57页 |
| 4.1.4 星斑川鲽中性粒细胞呼吸爆发活性的测定 | 第57页 |
| 4.1.5 ELISA法测定淋巴细胞细胞因子的实验设计 | 第57-58页 |
| 4.1.6 ELISA法测定中性粒细胞细胞因子的实验设计 | 第58页 |
| 4.1.7 免疫细胞培养上清液的样品处理 | 第58页 |
| 4.1.8 细胞培养上清中总蛋白浓度测定 | 第58页 |
| 4.1.9 星斑川鲽免疫细胞培养上清中IL-1β含量的测定 | 第58页 |
| 4.1.10 星斑川鲽免疫细胞培养上清中TNF-α含量的测定 | 第58-59页 |
| 4.1.11 星斑川鲽中性粒细胞培养上清中MPO含量的测定 | 第59页 |
| 4.1.12 实验数据处理 | 第59页 |
| 4.2 结果与分析 | 第59-65页 |
| 4.2.1 中性粒细胞形态及染色鉴定结果 | 第59页 |
| 4.2.2 中性粒细胞呼吸爆发活性测定 | 第59-60页 |
| 4.2.3 细胞培养上清中总蛋白浓度测定 | 第60-61页 |
| 4.2.4 淋巴细胞培养上清液中不同处理组IL-1β的含量测定 | 第61页 |
| 4.2.5 中性粒细胞培养上清液中不同处理组IL-1β的含量测定 | 第61-62页 |
| 4.2.6 淋巴细胞培养上清液中不同处理组TNF-α的含量测定 | 第62-63页 |
| 4.2.7 中性粒细胞培养上清液中不同处理组TNF-α的含量测定 | 第63-64页 |
| 4.2.8 中性粒细胞培养上清液中不同处理组MPO的含量测定 | 第64-65页 |
| 4.3 讨论 | 第65-70页 |
| 4.4 小结 | 第70-72页 |
| 第五章 总结与展望 | 第72-76页 |
| 5.1 总结 | 第72-73页 |
| 5.2 展望 | 第73-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 附录 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第90-92页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第92页 |
