| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 弓形虫病及其危害 | 第12页 |
| 1.2 弓形虫的历史和生活史 | 第12-13页 |
| 1.3 弓形虫的超微结构和重要的分泌器官 | 第13-14页 |
| 1.4 弓形虫棒状体 | 第14-17页 |
| 1.4.1 弓形虫棒状体蛋白 | 第14-16页 |
| 1.4.2 棒状体蛋白的定位 | 第16页 |
| 1.4.3 ROP2家族-棒状体蛋白激酶(ROPKS) | 第16-17页 |
| 1.5 弓形虫摄取宿主细胞内蛋白 | 第17-18页 |
| 1.6 酵母双杂交技术 | 第18页 |
| 1.7 CRISPR/Cas9技术 | 第18-19页 |
| 1.8 本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 ROP32原核表达载体构建及重组蛋白的诱导纯化 | 第20-28页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第20页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 原核表达载体pGEX-4T1ROP32的构建 | 第21-23页 |
| 2.2.2 ROP32蛋白原核表达与纯化 | 第23-24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-27页 |
| 2.3.1 ROP32蛋白的重组表达 | 第24-25页 |
| 2.3.2 ROP32编码密码子优化 | 第25-26页 |
| 2.3.3 密码子优化后ROP32重组表达 | 第26-27页 |
| 2.4 总结 | 第27-28页 |
| 第三章 ROP32相互作用蛋白的筛选及验证 | 第28-37页 |
| 3.1 材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.1.2 主要培养基及相关试剂配置 | 第28页 |
| 3.1.3 引物设计 | 第28-29页 |
| 3.2 方法 | 第29-33页 |
| 3.2.1 诱饵质粒pGBKT7-ROP32的构建 | 第29页 |
| 3.2.2 制备Y2H Gold酵母感受态细胞 | 第29-30页 |
| 3.2.3 诱饵质粒pGBKT7-ROP32毒性及自激活验证 | 第30页 |
| 3.2.4 筛选与ROP32蛋白有相互作用的宿主蛋白 | 第30-31页 |
| 3.2.5 SEC63蛋白与ROP32蛋白的相互作用 | 第31-33页 |
| 3.3 结果 | 第33-36页 |
| 3.3.1 诱饵质粒pGBKT7-ROP32的构建 | 第33-34页 |
| 3.3.2 诱饵质粒pGBKT7-ROP32毒性及自激活验证 | 第34页 |
| 3.3.3 筛选与ROP32蛋白相互作用的宿主蛋白 | 第34-36页 |
| 3.3.4 Co-IP验证SEC63蛋白与ROP32蛋白的相互作用 | 第36页 |
| 3.4 总结 | 第36-37页 |
| 第四章 ROP32基因敲除虫株构建及表型验证 | 第37-43页 |
| 4.1 材料与方法 | 第37-39页 |
| 4.1.1 重组质粒与实验动物 | 第37页 |
| 4.1.2 主要试剂与仪器 | 第37页 |
| 4.1.3 引物设计 | 第37页 |
| 4.1.4 ROP32敲除质粒的构建 | 第37-38页 |
| 4.1.5 ROP32稳定敲除株的构建 | 第38页 |
| 4.1.6 ROP32基因缺失虫株（T.gondii/△ ROP32）鉴定 | 第38-39页 |
| 4.1.7 ROP32基因缺失虫株复制能力和毒力的检测 | 第39页 |
| 4.2 结果 | 第39-42页 |
| 4.2.1 使用CRISPR/Cas9系统构建gRNA敲除载体 | 第39-40页 |
| 4.2.2 构建弓形虫ROP32稳定敲除RH虫株 | 第40页 |
| 4.2.3 ROP32基因缺失虫株的鉴定 | 第40页 |
| 4.2.4 T. gondii/△ ROP32虫株对虫体复制和毒力的影响 | 第40-42页 |
| 4.3 总结 | 第42-43页 |
| 第五章 讨论 | 第43-45页 |
| 第六章 全文总结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简历 | 第52页 |
