| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| 1.1 牛病毒性腹泻病毒概述 | 第14-15页 |
| 1.1.1 牛病毒性腹泻病原的发现和分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 病毒粒子的结构特征及理化性质 | 第15页 |
| 1.2 BVDV分类及亚型 | 第15-16页 |
| 1.3 流行病学 | 第16-17页 |
| 1.3.1 BVDV的宿主和传染源 | 第16页 |
| 1.3.2 BVDV的流行情况 | 第16-17页 |
| 1.4 病毒基因组 | 第17页 |
| 1.5 BVDV编码的蛋白及功能 | 第17-19页 |
| 1.6 BVDV的检测 | 第19-21页 |
| 1.7 BVDV的疫苗及防控 | 第21页 |
| 1.8 研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 牛病毒性腹泻病毒p80蛋白单克隆抗体的制备 | 第23-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-29页 |
| 2.1.1 细胞、毒株、质粒和实验动物 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 引物设计和目的基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.1.4 重组质粒的构建 | 第24-25页 |
| 2.1.5 p80蛋白的表达与纯化 | 第25-26页 |
| 2.1.6 重组蛋白的Western blot分析 | 第26页 |
| 2.1.7 小鼠的免疫 | 第26-27页 |
| 2.1.8 饲养层的制备 | 第27页 |
| 2.1.9 骨髓瘤（SP2/0）细胞的准备 | 第27页 |
| 2.1.10 脾细胞的准备 | 第27页 |
| 2.1.11 骨髓瘤（SP2/0）细胞和脾细胞的融合 | 第27-28页 |
| 2.1.12 间接ELISA的建立 | 第28页 |
| 2.1.13 阳性杂交瘤细胞株的筛选与克隆纯化 | 第28页 |
| 2.1.14 MAb亚类的鉴定 | 第28页 |
| 2.1.15 腹水制备及效价测定 | 第28-29页 |
| 2.1.16 MAb的间接免疫荧光(IFA)鉴定 | 第29页 |
| 2.1.17 MAb与猪瘟病毒交叉反应的间接免疫荧光检测(IFA) | 第29页 |
| 2.2 结果 | 第29-31页 |
| 2.2.1 目的基因的扩增与pET30A-P80重组质粒的构建 | 第29页 |
| 2.2.2 重组p80蛋白的表达与鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.3 重组蛋白p80的纯化与Western blot分析 | 第30页 |
| 2.2.4 杂交瘤细胞株的筛选、MAb亚类的鉴定及腹水效价的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.5 MAb间接免疫荧光检测 | 第31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 p80蛋白抗原表位的鉴定 | 第33-36页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-34页 |
| 3.1.1 试剂与仪器 | 第33页 |
| 3.1.2 p80蛋白截短表达方案 | 第33-34页 |
| 3.1.3 pGEX-6P-1 表达载体的构建及截短蛋白的诱导表达 | 第34页 |
| 3.1.4 诱导蛋白的SDS-PAGE和Western blot分析 | 第34页 |
| 3.2 SDS-PAGE和Western blot结果及分析 | 第34-35页 |
| 3.3 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 牛病毒性腹泻病毒LJ36/14的分离与鉴定 | 第36-43页 |
| 4.1 材料和方法 | 第36-37页 |
| 4.1.1 实验材料及样品 | 第36页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 4.1.3 样品处理与病毒分离 | 第36页 |
| 4.1.4 分离株的RT-PCR检测及测序 | 第36-37页 |
| 4.1.5 分离株的鉴定及其TCID50的测定 | 第37页 |
| 4.1.6 分离株的分子进化分析 | 第37页 |
| 4.2 结果 | 第37-42页 |
| 4.2.1 病毒分离及RT-PCR检测结果 | 第37-38页 |
| 4.2.2 分离株的免疫荧光鉴定 | 第38-39页 |
| 4.2.3 分离株的分子进化树的构建 | 第39-42页 |
| 4.3 讨论 | 第42-43页 |
| 第五章 全文结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简历 | 第50页 |
