| 摘要 | 第5-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-37页 |
| 1 角膜基本结构 | 第21-23页 |
| 1.1 角膜上皮层 | 第21页 |
| 1.2 角膜前弹力层 | 第21-22页 |
| 1.3 角膜基质层 | 第22页 |
| 1.4 角膜后弹力层 | 第22页 |
| 1.5 角膜内皮层 | 第22-23页 |
| 2 组织工程角膜概述 | 第23页 |
| 3 组织工程角膜种子细胞的研究概述 | 第23-26页 |
| 3.1 原代或传代细胞 | 第24页 |
| 3.2 成体干细胞 | 第24-25页 |
| 3.3 胚胎干细胞 | 第25页 |
| 3.4 永生化细胞系 | 第25-26页 |
| 4 组织工程角膜载体支架的研究概述 | 第26-30页 |
| 4.1 天然材料 | 第26-27页 |
| 4.1.1 羊膜 | 第26-27页 |
| 4.1.2 脱细胞角膜基质 | 第27页 |
| 4.2 生物大分子材料 | 第27-29页 |
| 4.2.1 胶原 | 第27-28页 |
| 4.2.2 丝素蛋白 | 第28页 |
| 4.2.3 纤维蛋白 | 第28-29页 |
| 4.2.4 壳聚糖 | 第29页 |
| 4.3 人工合成高分子材料 | 第29-30页 |
| 4.4 细胞片技术 | 第30页 |
| 5 脱细胞角膜在组织工程角膜中的应用 | 第30-36页 |
| 5.1 脱细胞方法 | 第31-34页 |
| 5.1.1 物理方法 | 第31-32页 |
| 5.1.2 化学方法 | 第32-33页 |
| 5.1.3 渗透溶液法 | 第33页 |
| 5.1.4 生物方法 | 第33-34页 |
| 5.1.5 螫合剂 | 第34页 |
| 5.1.6 醇类 | 第34页 |
| 5.2 脱细胞角膜在组织工程角膜构建中的应用 | 第34-36页 |
| 5.2.1 角膜基质细胞的接种 | 第35页 |
| 5.2.2 角膜基质细胞的接种 | 第35-36页 |
| 6 本文研究目的及意义 | 第36-37页 |
| 第二章 人角膜内皮细胞和基质细胞的扩增培养及其鉴定 | 第37-52页 |
| 1 材料与用品 | 第37-39页 |
| 1.1 实验材料 | 第37页 |
| 1.2 实验仪器 | 第37-38页 |
| 1.3 实验试剂 | 第38页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-42页 |
| 2.1 HCE细胞和HCS细胞的复苏和体外扩增培养 | 第39-40页 |
| 2.1.1 HCE细胞和HCS的复苏 | 第39-40页 |
| 2.1.2 HCE细胞和HCS细胞的体外扩增培养 | 第40页 |
| 2.2 HCE细胞和HCS细胞的生长特性测定 | 第40-41页 |
| 2.3 HCE细胞和HCS细胞的染色体组型分析 | 第41页 |
| 2.4 HCE细胞和HCS细胞的免疫化学检测 | 第41-42页 |
| 2.5 统计学分析 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-48页 |
| 3.1 HCE细胞的形态观察 | 第42-43页 |
| 3.2 HCE细胞和HCS细胞生长特性 | 第43-45页 |
| 3.3 HCE细胞和HCS细胞的染色体核型分析 | 第45-46页 |
| 3.4 HCE细胞和HCS细胞相关蛋白的表达 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 脱细胞猪角膜基质支架的制备及鉴定 | 第52-68页 |
| 1 材料与用品 | 第52-54页 |
| 1.1 实验材料 | 第52页 |
| 1.2 主要仪器 | 第52页 |
| 1.3 实验试剂 | 第52-53页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第53-54页 |
| 2 实验方法 | 第54-58页 |
| 2.1 脱细胞猪角膜基质支架的制备 | 第54-55页 |
| 2.1.1 猪角膜的取材 | 第55页 |
| 2.1.2 猪角膜的脱细胞处理与保存 | 第55页 |
| 2.2 脱细胞猪角膜基质光学性能检查 | 第55-56页 |
| 2.2.1 形态观察 | 第55页 |
| 2.2.2 透光率检测 | 第55-56页 |
| 2.3 脱细胞猪角膜基质组织结构学检查 | 第56-57页 |
| 2.3.1 石蜡切片与H&E染色 | 第56-57页 |
| 2.3.1.1 石蜡切片制作 | 第56页 |
| 2.3.1.2 H&E染色 | 第56-57页 |
| 2.3.2 透射电镜观察 | 第57页 |
| 2.3.3 扫描电镜观察 | 第57页 |
| 2.4 脱细胞猪角膜基质成分分析 | 第57页 |
| 2.4.1 含水量测定 | 第57页 |
| 2.4.2 冰冻切片与DAPI染色 | 第57页 |
| 2.4.3 DNA含量检测 | 第57页 |
| 2.4.4 阿利新兰染色 | 第57页 |
| 2.5 脱细胞猪角膜基质生物力学性能测试 | 第57-58页 |
| 2.6 统计学分析 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-65页 |
| 3.1 脱细胞猪角膜基质的理化性质鉴定 | 第58-60页 |
| 3.1.1 外观观察 | 第58-59页 |
| 3.1.2 透光率 | 第59-60页 |
| 3.2 脱细胞猪角膜基质的组织结构检查 | 第60-62页 |
| 3.2.1 H&E染色结果 | 第60-61页 |
| 3.2.2 透射电镜观察结果 | 第61-62页 |
| 3.2.3 扫描电镜观察结果 | 第62页 |
| 3.3 脱细胞猪角膜基质的成分 | 第62-64页 |
| 3.3.1 含水量测定 | 第62-63页 |
| 3.3.2 脱细胞猪角膜基质DAPI染色结果 | 第63页 |
| 3.3.3 DNA定量检测结果 | 第63-64页 |
| 3.3.4 脱细胞猪角膜基质阿利新兰染色结果 | 第64页 |
| 3.4 脱细胞猪角膜基质的生物力学检查结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第四章 脱细胞猪角膜基质支架的生物相容性研究 | 第68-78页 |
| 1 材料与用品 | 第68-70页 |
| 1.1 实验材料 | 第68页 |
| 1.2 主要仪器 | 第68-69页 |
| 1.3 实验试剂 | 第69页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第69-70页 |
| 2 实验方法 | 第70-72页 |
| 2.1 aPCS浸提液对HCE细胞及HCS细胞毒性检测 | 第70-71页 |
| 2.1.1 浸提液制备 | 第70页 |
| 2.1.2 形态学观察 | 第70页 |
| 2.1.3 增殖能力检测 | 第70-71页 |
| 2.2 接种于aPCS支架上的HCE细胞及HCS细胞免疫化学检测 | 第71-72页 |
| 2.2.1 HCS细胞的接种 | 第71页 |
| 2.2.2 HCS细胞免疫细胞化学检测 | 第71页 |
| 2.2.3 HCE细胞的接种 | 第71-72页 |
| 2.2.4 HCE细胞免疫细胞化学检测 | 第72页 |
| 2.3 统计学分析 | 第72页 |
| 3 结果 | 第72-76页 |
| 3.1 aPCS浸提液对HCE细胞及HCS细胞活力影响作用分析 | 第72-74页 |
| 3.1.1 HCE细胞和HCS细胞形态学评价 | 第72-74页 |
| 3.1.2 增殖能力检测结果 | 第74页 |
| 3.2 接种于aPCS支架的HCE细胞及HCS细胞属性和功能蛋白表达 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-77页 |
| 5 本章小结 | 第77-78页 |
| 第五章 体外构建组织工程人角膜后板层的实验研究 | 第78-96页 |
| 1 材料与用品 | 第78-80页 |
| 1.1 实验材料 | 第78页 |
| 1.2 实验仪器 | 第78-79页 |
| 1.3 实验试剂 | 第79页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第79-80页 |
| 2 实验方法 | 第80-85页 |
| 2.1 组织工程人后板层半角膜接种HCE细胞条件摸索 | 第80-82页 |
| 2.1.1 HCE细胞的接种方法的比较 | 第80-81页 |
| 2.1.1.1 HCE细胞温敏培养板法 | 第80-81页 |
| 2.1.1.2 HCE细胞直接接种法 | 第81页 |
| 2.1.1.3 接种HCE细胞的aPCS茜素红染色 | 第81页 |
| 2.1.2 aPCS接种HCE细胞的培养时间摸索 | 第81-82页 |
| 2.2 组织工程人后板层半角膜接种HCS细胞条件摸索 | 第82-83页 |
| 2.2.1 HCS细胞的接种方法的比较 | 第82页 |
| 2.2.1.1 HCS细胞的DiI细胞标记 | 第82页 |
| 2.2.1.2 HCS细胞直接接种法 | 第82页 |
| 2.2.1.3 HCS细胞注射接种法 | 第82页 |
| 2.2.1.4 HCS细胞标记的荧光观察 | 第82页 |
| 2.2.2 aPCS接种HCE细胞的培养时间摸索 | 第82-83页 |
| 2.3 组织工程人后板层半角膜的体外构建 | 第83-84页 |
| 2.4 体外构建组织工程人后板层半角膜的鉴定 | 第84-85页 |
| 2.4.1 TE-pHC内皮的茜素红染色 | 第84页 |
| 2.4.2 冰冻切片的细胞荧光标记观察 | 第84页 |
| 2.4.3 石蜡切片H&E染色 | 第84页 |
| 2.4.4 TE-pHC的免疫组织化学检测 | 第84页 |
| 2.4.5 TE-pHC的透射电镜观察 | 第84页 |
| 2.4.6 TE-pHC的扫描电镜观察 | 第84-85页 |
| 2.5 统计学方法 | 第85页 |
| 3 结果 | 第85-93页 |
| 3.1 aPCS接种HCE细胞的摸索 | 第85-88页 |
| 3.1.1 HCE细胞接种方式的比较 | 第85页 |
| 3.1.2 HCE细胞在后弹力层面形成单层情况 | 第85-87页 |
| 3.1.3 HCE细胞的分布与定位 | 第87-88页 |
| 3.2 aPCS接种HCS细胞的摸索 | 第88-89页 |
| 3.2.1 HCS细胞接种方式的比较 | 第88页 |
| 3.2.2 HCS细胞在aPCS支架中的分布情况 | 第88-89页 |
| 3.3 体外构建TE-pHC的鉴定 | 第89-93页 |
| 3.3.1 TE-pHC的内皮单层茜素红染色 | 第89-90页 |
| 3.3.2 细胞荧光标记观察和H&E染色 | 第90-91页 |
| 3.3.3 TE-pHC的免疫组织化学检测 | 第91-92页 |
| 3.3.4 TE-pHC的扫描电镜检测 | 第92页 |
| 3.3.5 TE-pHC的透射电镜检测 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-95页 |
| 5 本章小结 | 第95-96页 |
| 全文总结 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 个人简历 | 第112页 |
| 在校期间发表论文 | 第112页 |
