| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-16页 |
| 1 磷酸肌醇信号系统 | 第10页 |
| 2 磷脂酶C | 第10-16页 |
| 2.1 PLC的结构 | 第11-12页 |
| 2.2 PLC的活化机理 | 第12-13页 |
| 2.3 磷脂酶C功能研究 | 第13-16页 |
| 第二部分 研究论文 | 第16-54页 |
| 第一章 AtPLC9影响拟南芥的耐热性 | 第16-40页 |
| 1 实验材料试剂及仪器 | 第16页 |
| 1.1 实验材料 | 第16页 |
| 1.2 实验试剂 | 第16页 |
| 1.3 实验仪器 | 第16页 |
| 1.4 引物合成及测序 | 第16页 |
| 2 实验方法 | 第16-23页 |
| 2.1 拟南芥的培养 | 第16-17页 |
| 2.2 热激处理 | 第17页 |
| 2.3 DNA的提取 | 第17页 |
| 2.4 表达载体的构建 | 第17页 |
| 2.4.1 目的基因的扩增 | 第17页 |
| 2.4.2 连入pMAL-C2X载体 | 第17页 |
| 2.5 重组蛋白的诱导表达 | 第17-19页 |
| 2.5.1 菌体收集 | 第17页 |
| 2.5.2 SDS-PAGE检测诱导条带 | 第17-18页 |
| 2.5.3 检测目的蛋白在上清还是在包涵体表达 | 第18-19页 |
| 2.5.4 利用MBP柱子纯化目的蛋白 | 第19页 |
| 2.6 体外诱导表达磷脂酶C9蛋白的酶活性的测定 | 第19-20页 |
| 2.6.1 所用试剂的配置 | 第19-20页 |
| 2.6.2 酶活性测定步骤 | 第20页 |
| 2.7 植物组织中IP3的提取以及纯化 | 第20-22页 |
| 2.7.1 IP3的提取 | 第20-21页 |
| 2.7.2 从提取液中去除TCA纯化IP3提取液 | 第21页 |
| 2.7.3 IP3含量测定 | 第21-22页 |
| 2.8 胞内钙离子内流检测 | 第22-23页 |
| 2.8.1 拟南芥根原生质体的制备 | 第22页 |
| 2.8.2 膜片钳检测胞内钙离子内流 | 第22-23页 |
| 2.9 转基因植株GUS染色 | 第23页 |
| 2.10 拟南芥根细胞GFP荧光观察 | 第23页 |
| 3 实验结果及分析 | 第23-40页 |
| 3.1 AtPLC9组织表达分析及亚细胞定位观察(参与) | 第23-25页 |
| 3.1.1 参与AtPLC9组织表达分析(参与) | 第23-24页 |
| 3.1.2 AtPLC9亚细胞定位的观察(参与) | 第24-25页 |
| 3.2 热激后胞内IP3含量变化的测定(参与) | 第25-28页 |
| 3.2.1 绘制IP3标准曲线 | 第25-26页 |
| 3.2.2 37C处理时间的确定(参与) | 第26页 |
| 3.2.3 热激后胞内IP3含量变化测定(参与) | 第26-27页 |
| 3.2.4 AtPLC9与胞内钙离子的变化(参与) | 第27-28页 |
| 3.3 讨论 | 第28-29页 |
| 3.4 AtPLC3基因对拟南芥耐热性的影响 | 第29-33页 |
| 3.4.1 AtPLC3基因突变体表型 | 第29-30页 |
| 3.4.2 PLC9与PLC3基因双突植株耐热性分析 | 第30-31页 |
| 3.4.3 热激之后AtPLC9和AtPLC3基因表达差异 | 第31-32页 |
| 3.4.4 讨论 | 第32-33页 |
| 3.5 PLC蛋白纯化及体外分解底物(PIP2)酶活性的测定 | 第33-40页 |
| 3.5.1 表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.5.2 pMAL-c2X-PLC9诱导表达条件摸索 | 第34-35页 |
| 3.5.3 诱导蛋白的纯化与收集 | 第35-36页 |
| 3.5.4 蛋白酶活性的测定 | 第36-39页 |
| 3.5.5 讨论 | 第39-40页 |
| 第二章 水稻中转基因技术探索 | 第40-54页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第40页 |
| 1.1 实验材料 | 第40页 |
| 1.2 试剂和仪器 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-43页 |
| 2.1 DNA的提取 | 第40页 |
| 2.2 载体构建与水稻的遗传转化 | 第40-43页 |
| 2.2.1 目的片段的扩增 | 第40-41页 |
| 2.2.2 目的片段的回收 | 第41页 |
| 2.2.3 胶回收片段的连接 | 第41页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态制备 | 第41-42页 |
| 2.2.5 细菌转化 | 第42页 |
| 2.2.6 菌体PCR和酶切鉴定 | 第42页 |
| 2.2.7 农杆菌介导的水稻遗传转化及转基因水稻的筛选 | 第42-43页 |
| 2.2.7.1 水稻的遗传转化: | 第42-43页 |
| 2.2.7.2 转基因水稻的筛选: | 第43页 |
| 3 培养基 | 第43-47页 |
| 3.1 种子愈伤培养基(Ms) | 第43-44页 |
| 3.2 种子继代培养基(Ms) | 第44页 |
| 3.3 共培养培养基:(NBCO) | 第44-45页 |
| 3.4 选择培养基(s500) | 第45页 |
| 3.5 预分化培养基(NBM) | 第45-46页 |
| 3.6 分化培养基(NBD) | 第46页 |
| 3.7 生根壮苗培养基:(1/2M) | 第46-47页 |
| 4 实验结果及分析 | 第47-52页 |
| 4.1 水稻愈伤转化,抗性筛选及转基因植株的鉴定 | 第47页 |
| 4.2 常优1号水稻种子愈伤诱导 | 第47-49页 |
| 4.3 常优1号水稻种子愈伤转化及筛选 | 第49-51页 |
| 4.4 转基因株系DNA水平鉴定 | 第51-52页 |
| 5 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 个人简历 | 第57页 |
| 发表论文 | 第57页 |
| 致谢 | 第57页 |
