| 缩略词表 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 溶菌酶概述及分类 | 第11-14页 |
| 1.1.1 溶菌酶的概述 | 第11页 |
| 1.1.2 溶菌酶的分类 | 第11-13页 |
| 1.1.2.1 c-型溶菌酶 | 第11-12页 |
| 1.1.2.2 g-型溶菌酶 | 第12页 |
| 1.1.2.3 i-型溶菌酶 | 第12页 |
| 1.1.2.4 微生物源溶菌酶 | 第12页 |
| 1.1.2.5 植物源溶菌酶 | 第12页 |
| 1.1.2.6 噬菌体T4溶菌酶 | 第12-13页 |
| 1.1.3 溶菌酶的特性 | 第13页 |
| 1.1.4 溶菌酶的结构 | 第13-14页 |
| 1.2 溶菌酶的应用 | 第14-16页 |
| 1.2.1 溶菌酶在医疗中的应用 | 第14页 |
| 1.2.2 溶菌酶在生物研究中的应用 | 第14页 |
| 1.2.3 溶菌酶在饲料中的应用 | 第14-15页 |
| 1.2.4 溶菌酶在食品中的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.4.1 在海产品和水产品保鲜中的作用 | 第15页 |
| 1.2.4.2 在乳制品和蛋糕中的应用 | 第15页 |
| 1.2.4.3 在水果保鲜中的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.4.4 在低温肉制品中的应用 | 第16页 |
| 1.3 巴斯德毕赤酵母的外源蛋白表达的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 毕赤酵母表达系统的组成 | 第16-18页 |
| 1.3.1.1 宿主菌株 | 第16页 |
| 1.3.1.2 表达载体 | 第16-17页 |
| 1.3.1.3 影响外源蛋白表达的因素 | 第17-18页 |
| 1.3.2 巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第18页 |
| 1.4 溶菌酶密码子优化 | 第18-19页 |
| 1.4.1 密码子优化的简单介绍 | 第18页 |
| 1.4.2 密码子优化的方法 | 第18-19页 |
| 1.4.3 海参溶菌酶基因密码子优化 | 第19页 |
| 1.5 研究的主要内容、目的、意义和技术路线 | 第19-21页 |
| 1.5.1 研究的主要内容 | 第19-20页 |
| 1.5.2 研究的目的与意义 | 第20页 |
| 1.5.3 研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-32页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第21-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要溶液及缓冲液 | 第22-24页 |
| 2.1.5 培养基 | 第24-25页 |
| 2.2 全基因合成海参溶菌酶全长基因 | 第25-26页 |
| 2.2.1 密码子优化 | 第25页 |
| 2.2.2 密码子统计及偏好性分析 | 第25页 |
| 2.2.3 最终密码子选择 | 第25-26页 |
| 2.3 构建重组表达质粒pPIC9K-SjLys' | 第26-28页 |
| 2.3.1 双酶切pMD18-T-SjLys'和表达载体pPIC9K | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组表达质粒的构建及转化DH5 | 第27-28页 |
| 2.4 pPIC9K-SjLys'转化毕赤酵母GS115及筛选 | 第28-29页 |
| 2.4.1 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.4.2 pPIC9K-SjLys'质粒的线性化 | 第28-29页 |
| 2.4.3 电转化 | 第29页 |
| 2.4.4 含有目的基因的高拷贝毕赤酵母转化子的筛选 | 第29页 |
| 2.5 海参溶菌酶基因的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.6 表达产物的浓缩处理及SDS-PAGE检测 | 第30-31页 |
| 2.6.1 TCA法沉淀目的蛋白 | 第30页 |
| 2.6.2 表达产物的SDS-PAGE检测 | 第30-31页 |
| 2.7 重组海参溶菌酶多肽的抑菌谱的测定 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-40页 |
| 3.1 密码子优化 | 第32-34页 |
| 3.1.1 密码子使用频率分析 | 第32-33页 |
| 3.1.2 海参溶菌酶氨基酸的优化 | 第33-34页 |
| 3.2 重组海参溶菌酶表达载体和克隆载体的双酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.1 pMD18-T-SjLys'的双酶切鉴定 | 第34页 |
| 3.2.2 重组表达质粒pPIC9K-SjLys'双酶切验证 | 第34-35页 |
| 3.3 重组毕赤酵母高拷贝菌株筛选 | 第35-37页 |
| 3.4 重组海参溶菌酶诱导表达与抑菌活性分析 | 第37-40页 |
| 3.4.1 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第37-39页 |
| 3.4.2 抑菌活性分析 | 第39-40页 |
| 第四章 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
