| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1 红曲霉的研究 | 第14-16页 |
| 1.1 红曲霉的概述 | 第14页 |
| 1.2 红曲霉的功能与应用 | 第14-15页 |
| 1.2.1 产酶 | 第14页 |
| 1.2.2 制酒 | 第14-15页 |
| 1.2.3 红曲色素 | 第15页 |
| 1.2.4 药用成分 | 第15页 |
| 1.2.5 有害成分 | 第15页 |
| 1.3 红曲霉产淀粉酶的研究现状 | 第15-16页 |
| 2 淀粉酶的研究 | 第16-19页 |
| 2.1 淀粉酶的结构与分类 | 第16-17页 |
| 2.2 微生物产淀粉酶的研究进展 | 第17-18页 |
| 2.3 淀粉酶的提取方法 | 第18-19页 |
| 2.4 淀粉酶的功能与应用 | 第19页 |
| 2.4.1 食品领域 | 第19页 |
| 2.4.2 医药领域 | 第19页 |
| 3 立题背景和主要研究内容 | 第19-22页 |
| 3.1 立题背景 | 第19-20页 |
| 3.2 主要研究内容 | 第20-21页 |
| 3.3 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 红曲霉菌株库的构建 | 第22-41页 |
| 1 材料 | 第22-23页 |
| 1.1 实验材料 | 第22页 |
| 1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 1.3 培养基 | 第22-23页 |
| 1.3.1 PDA培养基 | 第22页 |
| 1.3.2 LB培养基 | 第22-23页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.1 红曲米的筛选与研磨 | 第23-24页 |
| 2.2 单菌落的分离与纯化 | 第24页 |
| 2.3 单菌落的形态观察 | 第24页 |
| 2.3.1 红曲霉菌落的形态观察 | 第24页 |
| 2.3.2 红曲霉菌落的显微结构观察 | 第24页 |
| 2.4 红曲霉菌株的鉴定 | 第24-28页 |
| 2.4.1 红曲霉菌株全基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.4.2 红曲霉菌株ITS引物的设计 | 第25页 |
| 2.4.3 红曲霉菌株ITS序列PCR体系的构建 | 第25-26页 |
| 2.4.4 割胶回收PCR产物 | 第26页 |
| 2.4.5 感受态菌株大肠杆菌DH5α的制备方法 | 第26-27页 |
| 2.4.6 构建T载体 | 第27页 |
| 2.4.7 转化与克隆测序 | 第27-28页 |
| 3 实验结果 | 第28-40页 |
| 3.1 单菌落的形态观察结果 | 第28-30页 |
| 3.2 单菌落的显微形态观察结果 | 第30-33页 |
| 3.3 单菌落的菌种鉴定结果 | 第33-40页 |
| 3.4 菌株的保存 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 红曲霉高产淀粉酶菌株的筛选与鉴定 | 第41-57页 |
| 1 材料 | 第41-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第41页 |
| 1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 1.3 培养基 | 第41-42页 |
| 1.3.1 PDA培养基 | 第41页 |
| 1.3.2 平板初筛培养基 | 第41页 |
| 1.3.3 液态复筛培养基 | 第41-42页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-48页 |
| 2.1 高产淀粉酶菌株的初筛 | 第42-43页 |
| 2.2 高产淀粉酶菌株的复筛 | 第43-45页 |
| 2.2.1 淀粉酶粗酶液的制备 | 第43页 |
| 2.2.2 淀粉酶酶活的测定方法 | 第43页 |
| 2.2.3 淀粉酶活力单位 | 第43-44页 |
| 2.2.5 碘液的配置 | 第44页 |
| 2.2.6 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第44-45页 |
| 2.3 目的菌株的鉴定 | 第45-48页 |
| 2.3.1 Mp-42菌株扩增ITS序列PCR体系的构建 | 第45-46页 |
| 2.3.2 割胶回收PCR产物 | 第46页 |
| 2.3.3 构建T载体 | 第46-47页 |
| 2.3.4 转化与进行克隆测序 | 第47页 |
| 2.3.5 Mp-42菌株菌落的形态观察 | 第47页 |
| 2.3.6 Mp-42菌株的显微结构观察 | 第47-48页 |
| 2.3.7 系统发育树的构建 | 第48页 |
| 2.4 检测基因的网络资源与序列分析软件 | 第48页 |
| 3 实验结果 | 第48-55页 |
| 3.1 菌株初筛结果 | 第48-50页 |
| 3.2 菌株复筛结果 | 第50页 |
| 3.3 Mp-42菌株的菌落形态观察 | 第50-51页 |
| 3.4 Mp-42菌株的显微形态观察 | 第51-52页 |
| 3.5 Mp-42菌株的鉴定 | 第52页 |
| 3.6 Mp-42菌株ITS序列分析结果 | 第52-54页 |
| 3.7 系统发育树的构建 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 Mp-42菌株产淀粉酶活性的研究 | 第57-72页 |
| 1 材料 | 第57-59页 |
| 1.1 实验材料 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂 | 第57-58页 |
| 1.3 培养基 | 第58页 |
| 1.3.1 PDA培养基 | 第58页 |
| 1.3.2 一级种子摇瓶培养基 | 第58页 |
| 1.3.3 二级发酵摇瓶培养基 | 第58页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第58-59页 |
| 2 实验方法 | 第59-62页 |
| 2.1 培养条件对Mp-42菌株产淀粉酶活性的影响 | 第59-61页 |
| 2.1.1 培养温度对Mp-42菌株产淀粉酶活性的影响 | 第59页 |
| 2.1.2 培养pH对Mp-42菌株产淀粉酶活性的影响 | 第59页 |
| 2.1.3 氮源对Mp-42菌株产淀粉酶活性的影响 | 第59-60页 |
| 2.1.4 蛋白胨浓度对Mp-42菌株产淀粉酶活性的影响 | 第60页 |
| 2.1.5 碳源对Mp-42菌株产淀粉酶活性的影响 | 第60页 |
| 2.1.6 淀粉浓度对Mp-42菌株产淀粉酶活性的影响 | 第60页 |
| 2.1.7 NaCl浓度对Mp-42菌株产淀粉酶活性的影响 | 第60-61页 |
| 2.1.8 淀粉,蛋白胨,NaCl三因素响应面试验 | 第61页 |
| 2.2 影响Mp-42菌株淀粉酶活反应的研究 | 第61-62页 |
| 2.2.1 反应温度对淀粉酶活的影响 | 第61页 |
| 2.2.2 反应pH对淀粉酶活的影响 | 第61-62页 |
| 2.2.3 金属离子对淀粉酶活的影响 | 第62页 |
| 3 实验结果 | 第62-70页 |
| 3.1 产淀粉酶最适培养温度 | 第62页 |
| 3.2 产淀粉酶最适培养pH | 第62-63页 |
| 3.3 产淀粉酶最适氮源 | 第63-64页 |
| 3.4 产淀粉酶最适蛋白胨浓度 | 第64-65页 |
| 3.5 产淀粉酶最适碳源 | 第65页 |
| 3.6 产淀粉酶最适淀粉浓度 | 第65页 |
| 3.7 产淀粉酶最适NaCl浓度 | 第65-66页 |
| 3.8 响应面试验结果分析 | 第66-69页 |
| 3.9 淀粉酶反应最适温度 | 第69页 |
| 3.10 淀粉酶反应最适pH | 第69-70页 |
| 3.11 不同金属离子对淀粉酶活的影响 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 淀粉酶发酵生产及其分离纯化 | 第72-81页 |
| 1 材料 | 第72-73页 |
| 1.1 实验材料 | 第72页 |
| 1.2 主要试剂 | 第72页 |
| 1.3 培养基 | 第72-73页 |
| 1.3.1 PDA培养基 | 第72页 |
| 1.3.2 种子培养基 | 第72页 |
| 1.3.3 补料培养基 | 第72-73页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第73页 |
| 2 实验方法 | 第73-77页 |
| 2.1 种子液上罐发酵 | 第73-74页 |
| 2.2 Mp-42菌株生长曲线的测定 | 第74页 |
| 2.3 Mp-42菌株淀粉酶活性的测定 | 第74页 |
| 2.4 Mp-42菌株产蛋白含量测定 | 第74-75页 |
| 2.4.1 考马斯亮蓝法测蛋白含量标准曲线的制备 | 第74-75页 |
| 2.4.2 Mp-42菌株产蛋白含量的检测方法 | 第75页 |
| 2.5 淀粉酶粗酶液SDS-PAGE电泳 | 第75-77页 |
| 2.5.1 SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳胶的制备 | 第75-76页 |
| 2.5.2 电泳考马斯亮蓝R-250的制备 | 第76页 |
| 2.5.3 电泳洗脱液的制备 | 第76页 |
| 2.5.4 还原型5~*SDS上样缓冲液 | 第76页 |
| 2.5.5 电泳缓冲液 | 第76页 |
| 2.5.6 Mp-42菌株产生的蛋白跑SDS-PAGE电泳 | 第76-77页 |
| 3 实验结果 | 第77-79页 |
| 3.1 Mp-42菌株生长颜色的变化 | 第77-78页 |
| 3.2 淀粉酶发酵生产 | 第78-79页 |
| 3.3 淀粉酶的分离纯化 | 第79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 第六章 小结与建议 | 第81-83页 |
| 1 小结 | 第81-82页 |
| 2 建议 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-90页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
