| 致谢 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第12-30页 |
| 1.1 高等植物绿色组织特异性表达启动子研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1. 高等植物绿色组织特异性表达启动子的种类 | 第13-16页 |
| 1.1.1.1 核酮糖1,5-二磷酸羧化/加氧酶小亚基(ribulose 1,5-bisphosphatecarboxylase/oxygenase small subunit,rbcS)基因启动子 | 第13-14页 |
| 1.1.1.2 植物补光叶绿素a/b蛋白复合体(chlorophyll Ⅱa/b bindingprotein,CAB)基因启动子 | 第14-15页 |
| 1.1.1.3 丙酮酸正磷酸双激酶(pyruvate,orthophosphatedikinase,PPDK)启动子 | 第15页 |
| 1.1.1.4 其它高等植物绿色组织特异性表达启动子 | 第15-16页 |
| 1.1.2 绿色组织特异启动子的调控元件 | 第16页 |
| 1.2 Cry蛋白研究进展 | 第16-25页 |
| 1.2.1 cry基因分类 | 第17页 |
| 1.2.2 Cry蛋白结构 | 第17-20页 |
| 1.2.3 Cry蛋白毒杀鳞翅目害虫的作用机理 | 第20-24页 |
| 1.2.4 CrylAc和223 | 第24-25页 |
| 1.3 抗虫转基因水稻存在的问题 | 第25-26页 |
| 1.4 有关转抗虫基因水稻存在问题的主要应对措施 | 第26-28页 |
| 1.4.1. 根据Cry蛋白杀虫机制改造抗虫基因 | 第26页 |
| 1.4.2 多基因堆积策略 | 第26-27页 |
| 1.4.3 选择合适启动子控制基因定时定位表达 | 第27-28页 |
| 1.4.3.1 组织特异性表达启动子 | 第27-28页 |
| 1.4.3.2 损伤诱导性特异启动子 | 第28页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第28-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-39页 |
| 2.1 材料 | 第30页 |
| 2.2 方法 | 第30-39页 |
| 2.2.1 分子基础实验操作方法 | 第30-32页 |
| 2.2.2 载体构建 | 第32-33页 |
| 2.2.2.1 双元载体构建 | 第32-33页 |
| 2.2.2.2 原核表达载体构建 | 第33页 |
| 2.2.3 农杆菌介导的水稻转化 | 第33页 |
| 2.2.4 转基因水稻鉴定 | 第33-36页 |
| 2.2.4.1 抗虫生物活性测定 | 第33-34页 |
| 2.2.4.2 Western blot分析 | 第34页 |
| 2.2.4.3 粗略评估蛋白含量 | 第34页 |
| 2.2.4.4 Southern blot分析 | 第34-35页 |
| 2.2.4.5 Tail-PCR分析侧翼序列和鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.4.6 抗草甘膦生物活性测定 | 第36页 |
| 2.2.5 实验中应用的引物(表2.2) | 第36-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-54页 |
| 3.1 组培转化获得转基因水稻植株 | 第39页 |
| 3.2 T_0代转基因水稻分析 | 第39-44页 |
| 3.2.1 转基因水稻幼苗对棉铃虫的抗性 | 第39-40页 |
| 3.2.2 Western blot检测转基因株系抗虫蛋白表达水平 | 第40-42页 |
| 3.2.3 携带pGreen启动子转基因株系对草甘膦的抗性 | 第42-44页 |
| 3.2.3.1 G10基因蛋白表达水平测定 | 第42-43页 |
| 3.2.3.2 转基因株系草甘膦生物抗性检测 | 第43-44页 |
| 3.3 转基因株系叶片和种子蛋白表达水平对比 | 第44-47页 |
| 3.3.1 不同启动子作用抗虫基因蛋白表达水平对比 | 第44-45页 |
| 3.3.2 携带pGreen启动子株系叶片和种子表达蛋白定量 | 第45-47页 |
| 3.4 T-DNA数目和插入位点分析 | 第47-50页 |
| 3.4.1 Southern blot分析T-DNA插入数目 | 第47-48页 |
| 3.4.2 转基因水稻株系S20 T-DNA侧翼序列分析 | 第48-50页 |
| 3.5 转基因水稻T_1代S20株系分析 | 第50-53页 |
| 3.5.1 S20株系对二化螟和稻纵卷叶螟的抗性 | 第50页 |
| 3.5.2 S20株系抗虫蛋白表达水平测定 | 第50-52页 |
| 3.5.3 S20株系农艺性状分析 | 第52-53页 |
| 3.6 转基因水稻S20株系T_2代挑选纯和植株 | 第53-54页 |
| 4 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 作者简历 | 第63页 |
