| 缩略语涵义 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1.1 引言 | 第9-10页 |
| 1.2 胰蛋白酶的重组表达 | 第10-15页 |
| 1.2.1 酵母表达系统 | 第11-12页 |
| 1.2.2 大肠杆菌表达系统 | 第12-14页 |
| 1.2.3 其它真菌 | 第14-15页 |
| 1.3 融合蛋白在原核表达过程中的应用 | 第15-18页 |
| 1.3.1 GST 表达系统 | 第15-16页 |
| 1.3.2 TrxA 表达系统 | 第16页 |
| 1.3.3 MBP 表达系统 | 第16页 |
| 1.3.4 SUMO 表达系统 | 第16-17页 |
| 1.3.5 DsbA 家族表达系统 | 第17-18页 |
| 1.3.6 其它融合系统 | 第18页 |
| 1.3.7 融合信号肽 | 第18页 |
| 1.4 多肽的分离纯化 | 第18-22页 |
| 1.4.1 亲和色谱 | 第18-20页 |
| 1.4.2 离子交换层析纯化 | 第20页 |
| 1.4.3 疏水作用层析 | 第20-21页 |
| 1.4.4 凝胶过滤层析 | 第21页 |
| 1.4.5 共价色谱 | 第21页 |
| 1.4.6 反相层析 | 第21-22页 |
| 1.5 本文研究的意义和主要内容 | 第22-23页 |
| 第二章 人源胰蛋白酶-1 基因的克隆 | 第23-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 克隆所用菌种与载体 | 第23页 |
| 2.1.2 克隆所用主要试验试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 克隆所用主要试验仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要培养基配制 | 第24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 Trypsin-1 全基因密码子优化和二级结构分析 | 第24页 |
| 2.2.2 表达载体的构建 | 第24-30页 |
| 2.3 试验结果 | 第30-34页 |
| 2.3.1 载体 pET39b-trypsin-1 翻译起始段 mRNA 二级结构软件分析结果 | 第30-31页 |
| 2.3.2 pET39b-trypsin-1 表达载体构建 | 第31-32页 |
| 2.3.3 p28-D~(mut)-trypsin 表达载体构建 | 第32-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 工程菌的表达和分析 | 第36-50页 |
| 3.1 试验材料 | 第36-38页 |
| 3.1.1 表达所用菌种和载体 | 第36页 |
| 3.1.2 表达所用主要试验试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 表达所用主要试验仪器 | 第36页 |
| 3.1.4 SDS-PAGE 电泳相关溶液配方与操作 | 第36-37页 |
| 3.1.5 蛋白纯化部分溶液配制 | 第37-38页 |
| 3.2 重组 Trypsin-1 的诱导表达 | 第38-42页 |
| 3.2.1 工程菌生长曲线 | 第38页 |
| 3.2.2 重组质粒 pET39b-trypsin-1 的表达 | 第38-39页 |
| 3.2.3 重组质粒 p28-D~(mut)-trypsin 的表达 | 第39页 |
| 3.2.4 BCA 法测定蛋白浓度 | 第39-40页 |
| 3.2.5 重组蛋白的分离纯化 | 第40-41页 |
| 3.2.6 重组蛋白包涵体的复性 | 第41页 |
| 3.2.7 Trypsin-1 活性测定 | 第41-42页 |
| 3.3 试验结果 | 第42-48页 |
| 3.3.1 重组质粒 pET39b-trypsin-1 的表达和条件优化 | 第42-44页 |
| 3.3.2 重组质粒 p28-D~(mut)-trypsin 的表达、条件优化 | 第44-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 结论与展望 | 第50-52页 |
| 4.1 结论 | 第50页 |
| 4.2 展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
