| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-15页 |
| 1.1 概述 | 第9页 |
| 1.2 本课题的研究背景 | 第9-13页 |
| 1.2.1 木糖代谢菌株的构建和优化 | 第9-10页 |
| 1.2.2 重组酿酒酵母菌株的发酵优势 | 第10-11页 |
| 1.2.3 木糖代谢系统 | 第11-12页 |
| 1.2.4 木糖代谢系统的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 本文研究的背景、内容和目的 | 第13-15页 |
| 1.3.1 本文研究的菌株背景 | 第13-14页 |
| 1.3.2 本研究的内容 | 第14-15页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第15-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-22页 |
| 2.1.1 实验所用质粒、引物和菌株 | 第15-18页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第20-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第23页 |
| 2.2.3 小规模提取大肠杆菌质粒法（CTAB法） | 第23页 |
| 2.2.4 酵母染色体的快速分离 | 第23-24页 |
| 2.2.5 酵母细胞的转化 | 第24页 |
| 2.2.6 PCR扩增反应 | 第24-25页 |
| 2.2.7 DNA的限制性酶切反应 | 第25-26页 |
| 2.2.8 DNA的连接反应 | 第26页 |
| 2.2.9 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| 2.2.10 从琼脂糖中来回收DNA | 第27页 |
| 2.2.11 一步基因置换法缺失目的基因 | 第27-28页 |
| 2.2.12 两步基因置换方法 | 第28页 |
| 2.2.13 测定蛋白质的浓度方法（Bio-Rad方法） | 第28页 |
| 2.2.14 玻璃珠法提取酿酒酵母总蛋白 | 第28-29页 |
| 2.2.15 细胞干重测定 | 第29页 |
| 2.2.16 酶活测定 | 第29页 |
| 2.3 发酵过程和色谱测定 | 第29-32页 |
| 2.3.1 发酵过程 | 第29-30页 |
| 2.3.2 HPLC色谱测定 | 第30-32页 |
| 第三章 外源NADP+依赖的甘油醛-3-磷酸脱氢酶对酿酒酵母木糖代谢的影响 | 第32-54页 |
| 3.1 概述 | 第32页 |
| 3.2 整合质粒的构建及酵母内源 zwf1 基因的缺失 | 第32-33页 |
| 3.3 变异链球菌 GAPN 基因在重组酿酒酵母中的过表达及重组子的发酵 | 第33-44页 |
| 3.3.1 重组质粒YCPlac33-pPGK1-GAPN-tPGK1的构建 | 第34页 |
| 3.3.2 重组质粒YCPlac33-Phxt7-GAPN的构建 | 第34-35页 |
| 3.3.3 重组质粒YCPlac33-pFBA1-GAPN的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.4 重组质粒在K6X( zwf1)和K6X-NOXE( zwf1)中的转化和发酵 | 第36-37页 |
| 3.3.5 微好氧条件下的木糖发酵 | 第37-43页 |
| 3.3.6 外源GAPN和内源GAPDH蛋白的酶活测定 | 第43页 |
| 3.3.7 微好氧条件下的混合糖发酵 | 第43-44页 |
| 3.4 在酿酒酵母中过表达 K.lactic 的 GDP1 基因 | 第44-52页 |
| 3.4.1 重组质粒YCPlac33-pPGK1-GDP1-tPGK1的构建 | 第44-45页 |
| 3.4.2 构建重组质粒YCPlac33-pCCW12-GDP137 | 第45-47页 |
| 3.4.3 重组质粒YCPlac33-pHXT7-GAPN的构建 | 第47页 |
| 3.4.4 微好氧条件下的木糖发酵 | 第47-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 第四章 黑曲霉的转氢酶NNT对酿酒酵母木糖发酵的影响 | 第54-64页 |
| 4.1 概述 | 第54页 |
| 4.2 黑曲霉转氢酶NNT在酿酒酵母中的定位 | 第54-59页 |
| 4.2.1 重组质粒YCPlac22-POS5-mRuby-CYCT的构建 | 第55-56页 |
| 4.2.2 载体质粒YCPlac33-pPGK1-NNT-GFP-CYCT的构建 | 第56-58页 |
| 4.2.3 酵母的荧光表达 | 第58-59页 |
| 4.3 转氢酶基因 NNT 对木糖发酵的影响 | 第59-63页 |
| 4.3.1 重组质粒的构建 | 第59-63页 |
| 4.4 本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 ：总结与展望 | 第64-66页 |
| 5.1 总结 | 第64页 |
| 5.2 展望 | 第64-66页 |
| 第六章 ：参考文献 | 第66-71页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
