| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 文献综述 | 第14-37页 |
| 第一章 抗病转基因动物生产、鉴定及其应用 | 第14-24页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| ·转基因动物的应用 | 第15-17页 |
| ·转基因克隆动物的生产方法 | 第17-24页 |
| ·转基因动物生产与乳腺炎的发生 | 第19-21页 |
| ·重组蛋白的选择 | 第21-24页 |
| 第二章 人β防御素3 及其抗病特性 | 第24-30页 |
| ·防御素 | 第24-25页 |
| ·人β-防御素的结构 | 第25-26页 |
| ·β-防御素及其在疾病治疗中的作用 | 第26页 |
| ·hBD-3 的表达和调控机制 | 第26-29页 |
| ·抗微生物活性及其作用机理 | 第26-28页 |
| ·人β-防御素3 的结构和功能的关系 | 第28-29页 |
| ·人β-防御素3 的使用前景 | 第29-30页 |
| 第三章 抗病转基因动物生物安全评价 | 第30-37页 |
| ·转基因动物安全评价 | 第30-31页 |
| ·转基因生物技术和政策分析 | 第31页 |
| ·转基因的设计策略 | 第31-32页 |
| ·转基因的安全评价体系 | 第32-33页 |
| ·转基因的安全评价的因素 | 第33-35页 |
| ·转基因的受体动物 | 第33页 |
| ·转基因的来源 | 第33页 |
| ·转基因的载体构建和遗传修饰 | 第33-34页 |
| ·转基因食品生产 | 第34页 |
| ·转基因表达的生物评价 | 第34-35页 |
| ·转基因检测 | 第35页 |
| ·DNA 水平的检测 | 第35页 |
| ·插入位点检测 | 第35页 |
| ·拷贝数的检测 | 第35页 |
| ·展望 | 第35-37页 |
| 试验研究 | 第37-95页 |
| 第四章 转人防御素3 基因的牛乳腺上皮细胞株的建立 | 第37-55页 |
| ·材料与方法 | 第37-45页 |
| ·动物组织 | 第37页 |
| ·载体与菌种 | 第37页 |
| ·工具酶与其他试剂 | 第37页 |
| ·主要实验仪器 | 第37-38页 |
| ·phBD3 质粒鉴定 | 第38-39页 |
| ·牛乳腺上皮细胞的分离培养 | 第39-40页 |
| ·牛乳腺上皮细胞的生物学特征鉴定 | 第40-41页 |
| ·质粒phBD3 转染牛乳腺上皮细胞 | 第41-42页 |
| ·阳性细胞克隆的筛选与细胞株的获得 | 第42-45页 |
| ·结果 | 第45-52页 |
| ·重组质粒 | 第45-46页 |
| ·重组质粒phBD3 的PCR 扩增 | 第46页 |
| ·SacI 和SalI 双酶切与ApaLI 单酶切鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的原代培养及传代培养 | 第47页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞特异性β-酪蛋白基因鉴定 | 第47-48页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞表面标志的表达鉴定 | 第48页 |
| ·牛乳腺上皮细胞核型分析 | 第48-49页 |
| ·G418 对奶牛乳腺上皮细胞最小致死量测定 | 第49页 |
| ·电穿孔介导的phBD3 乳腺上皮细胞的转染 | 第49页 |
| ·稳定转染的阳性细胞克隆形成及细胞株筛选 | 第49-50页 |
| ·阳性细胞株的鉴定 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第五章 转人防御素3 基因的牛乳腺上皮细胞阳性细胞株的诱导表达及其活性分析 | 第55-70页 |
| ·材料与方法 | 第55页 |
| ·细胞株 | 第55页 |
| ·工具酶与其他试剂 | 第55页 |
| ·主要实验仪器 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-60页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞阳性细胞株的诱导表达 | 第55-56页 |
| ·阳性细胞株基因组DNA 限制性内切酶酶切和电泳 | 第56页 |
| ·探针制备 | 第56-57页 |
| ·DNA 转膜转移和固定 | 第57页 |
| ·阳性细胞株的Southern 鉴定 | 第57-58页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞培养上清液hBD3 蛋白的ELISA 定量检测 | 第58页 |
| ·Tricine SDS-PAGE 电泳及western blot 检测 | 第58-59页 |
| ·牛乳腺上皮细胞培养上清液hBD3 蛋白的抑菌活性检测 | 第59-60页 |
| ·hBD3 蛋白对牛乳腺上皮细胞阳性细胞株生长和增殖的影响 | 第60页 |
| ·数据分析 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-68页 |
| ·阳性细胞株southern blot 杂交检测 | 第60-63页 |
| ·阳性细胞株的诱导表达上清液hBD3 蛋白的抑菌活性分析 | 第63-64页 |
| ·组胺对牛乳腺上皮阳性细胞株的hBD3 分泌的影响 | 第64-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第六章 转hBD3 基因克隆牛的的研制 | 第70-80页 |
| ·材料与方法 | 第70页 |
| ·主要仪器 | 第70页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第70页 |
| ·受体牛 | 第70页 |
| ·试验方法 | 第70-73页 |
| ·卵母细胞的采集 | 第70-71页 |
| ·卵母细胞的成熟培养 | 第71页 |
| ·体外成熟卵母细胞的去核 | 第71-72页 |
| ·转β-防御素3 基因奶牛成纤维细胞的阳性细胞准备 | 第72页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的原代培养 | 第72页 |
| ·成纤维细胞传代培养与冻存 | 第72页 |
| ·成纤维细胞 β-防御素 3 基因电转染 | 第72页 |
| ·转染β-防御素3 基因成纤维细胞筛选及鉴定 | 第72页 |
| ·阳性成纤维细胞准备 | 第72页 |
| ·核移植及转基因克隆胚获得 | 第72-73页 |
| ·转基因克隆胚EGFP 荧光蛋白表达检测 | 第73页 |
| ·转基因克隆胚的胚胎移植和早期妊娠B 超鉴定 | 第73页 |
| ·结果 | 第73-78页 |
| ·卵母细胞收集与成熟培养 | 第73-74页 |
| ·供体细胞与核移植 | 第74-76页 |
| ·克隆胚的获得 | 第76页 |
| ·转基因克隆胚的胚胎移植及妊娠B 超检测 | 第76-77页 |
| ·转基因克隆牛的产生 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 第七章 转hBD3 基因克隆牛的检测 | 第80-95页 |
| ·材料与方法 | 第80-86页 |
| ·试验材料 | 第80页 |
| ·主要试剂 | 第80页 |
| ·转基因牛血液基因组DNA 提取 | 第80页 |
| ·转基因克隆牛hBD3 基因的多重PCR 鉴定 | 第80-81页 |
| ·Southern blotting 分析外源基因整合 | 第81-82页 |
| ·TaqMan Real-time PCR 拷贝数分析 | 第82-84页 |
| ·荧光原位杂交（FISH）染色体定位检测 | 第84-85页 |
| ·反向PCR 技术检测侧翼序列 | 第85-86页 |
| ·结果 | 第86-92页 |
| ·组织基因组DNA 提取 | 第86页 |
| ·转基因克隆牛多重PCR 检测 | 第86页 |
| ·转基因克隆牛人防御素3 的基因组整合分析 | 第86-88页 |
| ·Real-Time PCR 定量外源基因拷贝数 | 第88-89页 |
| ·荧光原位杂交检测 | 第89-90页 |
| ·反向PCR 侧翼序列检测 | 第90-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| ·小结 | 第94-95页 |
| 结论 | 第95-96页 |
| 创新之处和进一步研究的课题 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-111页 |
| 附录 | 第111-118页 |
| 缩略词 | 第118-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 作者简介 | 第122页 |
