| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-15页 |
| 1.1 烟粉虱的入侵和危害 | 第11-12页 |
| 1.2 Serpin家族及其在昆虫中的功能 | 第12-13页 |
| 1.3 昆虫天然免疫反应简介 | 第13-15页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第15页 |
| 2 实验材料 | 第15-20页 |
| 2.1 供试材料 | 第15-17页 |
| 2.2 实验仪器 | 第17页 |
| 2.3 主要培养基 | 第17页 |
| 2.4 主要试剂的配制 | 第17-20页 |
| 2.4.1 核酸实验相关试剂 | 第17-18页 |
| 2.4.2 SDS-PAGE相关试剂 | 第18-19页 |
| 2.4.3 酶联免疫（ELISA）相关试剂 | 第19-20页 |
| 2.4.4 Western blot相关试剂 | 第20页 |
| 3 实验方法 | 第20-45页 |
| 3.1 烟粉虱丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆 | 第20-32页 |
| 3.1.1 烟粉虱总RNA的提取及检测 | 第20-22页 |
| 3.1.2 烟粉虱Serpin基因（BtSerpin）已知序列的扩增 | 第22-27页 |
| 3.1.3 BtSerpin基因全长序列的获得 | 第27-32页 |
| 3.2 BtSerpin基因的表达模式研究 | 第32-36页 |
| 3.2.1 烟粉虱的收集 | 第32页 |
| 3.2.2 荧光定量PCR反转录反应 | 第32-33页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR检测基因表达 | 第33-36页 |
| 3.3 原核表达及抗血清的制备 | 第36-45页 |
| 3.3.1 BtSerpin重组表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 3.3.2 BtSerpin基因的原核表达及Western blot检测 | 第38-43页 |
| 3.3.3 BtSerpin纯化蛋白浓度的测定 | 第43页 |
| 3.3.4 多克隆抗体的制备 | 第43-44页 |
| 3.3.5 间接法ELISA测定抗血清抗体效价 | 第44页 |
| 3.3.6 克隆抗体特异性的分析 | 第44-45页 |
| 3.3.7 烟粉虱不同龄期Serpin蛋白相对表达量的检测 | 第45页 |
| 4 实验结果与分析 | 第45-61页 |
| 4.1 Serpin已知序列的扩增 | 第45-46页 |
| 4.1.1 烟粉虱总RNA的提取 | 第45页 |
| 4.1.2 Serpin Unigene片段的扩增 | 第45-46页 |
| 4.2 Serpin全长序列的获得 | 第46-53页 |
| 4.2.1 Serpin的 5’和 3’端序列的扩增 | 第46-47页 |
| 4.2.2 Serpin基因的全序列拼接和分析 | 第47-53页 |
| 4.3 Serpin基因的龄期表达模式分析 | 第53-55页 |
| 4.3.1 Serpin基因和β-actin荧光定量PCR引物的检测。 | 第53页 |
| 4.3.2 Serpin和β-actin荧光定量PCR扩增的标准曲线 | 第53-54页 |
| 4.3.3 Serpin基因的龄期表达差异分析 | 第54-55页 |
| 4.4 pET-32a-Serpin重组表达载体的构建与原核表达 | 第55-61页 |
| 4.4.1 烟粉虱Serpin开放阅读框（ORF）的获得 | 第55-56页 |
| 4.4.2 重组表达载体pET-32a-Serpin的构建及在大肠杆菌BL21中的鉴定 | 第56页 |
| 4.4.3 pET-32a-Serpin的原核表达 | 第56-59页 |
| 4.4.4 多克隆抗体的制备与检测 | 第59-60页 |
| 4.4.5 烟粉虱不同龄期Serpin蛋白表达模式的检测 | 第60-61页 |
| 5 讨论与结论 | 第61-65页 |
| 5.1 结论 | 第61页 |
| 5.2 讨论 | 第61-64页 |
| 5.3 需要进一步研究的问题 | 第64页 |
| 5.4 本研究的创新点 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
