| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| 1 人视黄醇结合蛋白概述 | 第10-16页 |
| 1.1 RBP的基因结构 | 第10页 |
| 1.2 RBP的理化性质 | 第10-11页 |
| 1.3 RBP的分子结构 | 第11-12页 |
| 1.4 RBP的分类 | 第12页 |
| 1.5 RBP的生理功能 | 第12-13页 |
| 1.6 RBP的分子相互作用 | 第13页 |
| 1.7 RBP的临床应用 | 第13-14页 |
| 1.8 RBP的测定方法 | 第14-15页 |
| 1.9 RBP的提取方法 | 第15-16页 |
| 2 化脓性链球菌溶血素O概述 | 第16-19页 |
| 2.1 SLO的产生和提纯 | 第16-17页 |
| 2.2 SLO的理化性质 | 第17页 |
| 2.3 SLO的分子结构 | 第17-18页 |
| 2.4 SLO溶解红细胞的机制 | 第18-19页 |
| 2.5 SLO的心脏毒性作用 | 第19页 |
| 2.6 SLO与临床应用 | 第19页 |
| 3 中国体外诊断试剂发展现状 | 第19-20页 |
| 4 基因重组蛋白质的表达系统和包涵体处理 | 第20-21页 |
| 4.1 基因重组蛋白质的表达系统 | 第20-21页 |
| 4.2 包涵体处理 | 第21页 |
| 5 本文研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 SLO在大肠杆菌中的表达纯化研究 | 第22-42页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| 1.1 菌种和质粒 | 第22页 |
| 1.2 培养基 | 第22-23页 |
| 1.3 主要试剂及来源 | 第23页 |
| 1.4 主要设备及来源 | 第23-24页 |
| 1.5 DNA引物合成及测序服务 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-34页 |
| 2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.2 质粒转化 | 第25页 |
| 2.3 DNA酶切反应,磷酸化反应,连接反应,去磷酸化反应及浓缩 | 第25-26页 |
| 2.4 质粒的提取及纯化和琼脂糖电泳胶回收DNA | 第26页 |
| 2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26-27页 |
| 2.6 SLO的基因在热激表达载体上的构建和表达 | 第27-28页 |
| 2.7 SLO的基因在冷激表达载体pEXC上的表达及SLO的纯化 | 第28-31页 |
| 2.8 质粒pEXC-slo的在大肠杆菌中的表达优化 | 第31-32页 |
| 2.9 SLO的蛋白浓度测定 | 第32-33页 |
| 2.10 重组表达的SLO的溶血活性分析 | 第33页 |
| 2.11 重组表达的SLO的Western Blot分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-40页 |
| 3.1 SLO的基因在热激表达载体pHsh上的构建和表达 | 第34-36页 |
| 3.2 SLO基因在冷激表达载体pEXC中的构建和表达 | 第36-37页 |
| 3.3 质粒pEXC-slo的在大肠杆菌中的表达优化 | 第37-39页 |
| 3.4 SLO的分离纯化 | 第39页 |
| 3.5 重组表达的SLO的溶血活性分析 | 第39-40页 |
| 3.6 重组表达的SLO的Western Blot分析 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 RBP在大肠杆菌和粟酒裂殖酵母中的表达纯化研究 | 第42-60页 |
| 1 材料 | 第42-44页 |
| 1.1 菌种和质粒 | 第42页 |
| 1.2 培养基 | 第42-44页 |
| 1.3 主要试剂及来源 | 第44页 |
| 1.4 主要设备及来源 | 第44页 |
| 1.5 DNA引物合成及测序服务 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-49页 |
| 2.1 一般基因操作方法及蛋白浓度测定 | 第44页 |
| 2.2 粟酒裂殖酵母感受态细胞的制备和醋酸锂转化 | 第44-45页 |
| 2.3 人RBP的cDNA在大肠杆菌中的表达 | 第45-47页 |
| 2.4 RBP的cDNA在粟酒裂殖酵母中的表达 | 第47-48页 |
| 2.5 目的蛋白RBP的纯化 | 第48-49页 |
| 2.6 重组表达的RBP的Western Blot分析 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-58页 |
| 3.1 S.pombe AgfaA的生长曲线测定 | 第49-50页 |
| 3.2 RBP的cDNA在大肠杆菌中的表达 | 第50-55页 |
| 3.3 人RBP的cDNA在粟酒裂殖酵母中的表达 | 第55-57页 |
| 3.4 目的蛋白RBP的纯化 | 第57-58页 |
| 3.5 重组表达的RBP Western Blot分析 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 全文主要结论和创新 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
