| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 综述 | 第11-15页 |
| 1.1 蛋白质融合标签与亲和层析 | 第11页 |
| 1.2 细胞内蛋白自剪切系统 | 第11-12页 |
| 1.3 N-乙酰-D-神经氨酸的酶法合成 | 第12-14页 |
| 1.4 重组工程 | 第14-15页 |
| 第2章 蛋白质的融合标签与亲和层析及细胞内蛋白自剪切 | 第15-27页 |
| 2.1 蛋白质的融合表达与亲和层析 | 第15-20页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第16-18页 |
| 2.1.3 实验结果 | 第18-20页 |
| 2.1.4 讨论 | 第20页 |
| 2.2 基于基因工程的细胞内的自剪切系统 | 第20-27页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第22-23页 |
| 2.2.3 实验结果 | 第23-26页 |
| 2.2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 第3章 N-乙酰-D-神经氨酸的酶催化活性测定 | 第27-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 本节所用菌株和质粒 | 第27页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.3 主要设备 | 第28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-29页 |
| 3.2.1 全细胞酶液的制备 | 第28页 |
| 3.2.2 酶催化体系 | 第28-29页 |
| 3.2.3 TBA法测定神经氨酸含量 | 第29页 |
| 3.2.4 HPLC测定神经氨酸的含量 | 第29页 |
| 3.3 实验结果 | 第29-35页 |
| 3.3.1 BT0453和nanA酶的共表达重组克隆构建 | 第29页 |
| 3.3.2 LS2402菌株 | 第29-30页 |
| 3.3.3 DE3/pLS1845和LS2402蛋白质酶的诱导表达 | 第30-31页 |
| 3.3.4 TBA法测定N-乙酰-D神经氨酸标准曲线的建立 | 第31页 |
| 3.3.5 TBA法测定DE3/pLS1845全细胞酶催化Neu5Ac的含量 | 第31-32页 |
| 3.3.6 HPLC法测定N-乙酰-D神经氨酸标准曲线的建立 | 第32-33页 |
| 3.3.7 HPLC法测定DE3/pLS1845全细胞酶催化Neu5Ac的含量 | 第33页 |
| 3.3.8 TBA、HPLC法测定LS2402全细胞酶催化Neu5Ac的含量 | 第33-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第4章 促进N-乙酰-D神经氨酸产量提高菌株的构建 | 第36-53页 |
| 4.1 重组酶表达质粒pLS2833的构建 | 第36-40页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 4.1.3 实验结果 | 第38-40页 |
| 4.1.4 讨论 | 第40页 |
| 4.2 LS2402基因组氯霉素基因的敲除 | 第40-47页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 4.2.3 实验结果 | 第44-46页 |
| 4.2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 4.3 提高Neu5Ac产量基因的克隆构建与表达 | 第47-53页 |
| 4.3.1 实验材料 | 第47-49页 |
| 4.3.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 4.3.3 实验结果 | 第51-52页 |
| 4.3.4 讨论 | 第52-53页 |
| 总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 在读期间发表的学术论文及专利 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
