| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 1、类泛素SUMO化修饰机制 | 第15-17页 |
| 1.1 类泛素SUMO化修饰的发现 | 第15-16页 |
| 1.2 类泛素SUMO蛋白家族分类与结构 | 第16-17页 |
| 1.3 底物蛋白的选择和类泛素SUMO共价结合 | 第17页 |
| 2.类泛素SUMO修饰底物蛋白生化途径 | 第17-18页 |
| 3.参与类泛素SUMO化修饰周期的酶 | 第18-20页 |
| 3.1 类泛素SUMO激活酶E1 | 第18-19页 |
| 3.2 类泛素SUMO偶联酶E2 | 第19-20页 |
| 3.3 类泛素SUMO连接酶E3 | 第20页 |
| 4.类泛素SUMO修饰的底物蛋白和类泛素化修饰在机体中的作用 | 第20-23页 |
| 4.1 类泛素SUMO修饰的底物蛋白 | 第20页 |
| 4.2 类泛素SUMO化修饰在核浆物质转运中的作用 | 第20-21页 |
| 4.3 类泛素SUMO在线粒体分裂中的作用 | 第21页 |
| 4.4 类泛素SUMO在转录因子调控中的作用 | 第21-22页 |
| 4.5 类泛素SUMO在DNA损伤修复和基因组稳定性调控中的作用 | 第22页 |
| 4.6 类泛素SUMO在细胞凋亡中的作用 | 第22-23页 |
| 5 类泛素SUMO化修饰与细菌感染 | 第23-24页 |
| 5.1 类泛素化修饰与志贺氏菌感染 | 第24页 |
| 5.2 类泛素化修饰与李斯特菌感染 | 第24页 |
| 6.总结 | 第24-25页 |
| 第二章 实验研究 | 第25-62页 |
| 实验一 布鲁氏菌侵染对类泛素SUMO-1/2/3 和偶联酶Ubc-9 表达的影响 | 第25-32页 |
| 1 材料与方法 | 第26-27页 |
| 1.1 材料 | 第26页 |
| 1.1.1 主要试验材料 | 第26页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 1.2 方法 | 第26-27页 |
| 1.2.1 布鲁氏菌 16M、布鲁氏菌M5-90侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7 | 第26页 |
| 1.2.2 qRT-PCR检测类泛素SUMO-1/2/3 和偶联酶Ubc-9 mRNA转录水平 | 第26-27页 |
| 1.2.3 Western blotting检测类泛素SUMO-1 蛋白表达量 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-30页 |
| 2.1 布鲁氏菌 16M、布鲁氏菌M5-90侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7 对类泛素SUMO-1/2/3 和偶联酶Ubc-9 mRNA转录水平的影响 | 第27-29页 |
| 2.2 布鲁氏菌 16M、布鲁氏菌M5-90侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7 类泛素SUMO-1 蛋白表达水平 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 4 结论 | 第31-32页 |
| 实验二 类泛素SUMO和偶联酶Ubc-9 在布鲁氏菌侵染过程中对细胞凋亡影响的研究 | 第32-54页 |
| 1.材料与方法 | 第33-44页 |
| 1.1 材料 | 第33-34页 |
| 1.1.1 主要实验材料 | 第33页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 1.1.3 仪器 | 第33-34页 |
| 1.2 方法 | 第34-42页 |
| 1.2.1 慢病毒干扰载体的构建 | 第34-40页 |
| 1.2.2 慢病毒过表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 1.3 统计学分析 | 第42-43页 |
| 1.4 小鼠基因SUMO1/2/3 和Ubc-9 在布鲁氏菌侵染小鼠细胞中的作用 | 第43-44页 |
| 1.4.1 流式细胞仪检测细胞凋亡率 | 第43页 |
| 1.4.2 CFU计数 | 第43-44页 |
| 2 实验结果 | 第44-52页 |
| 2.1 构建pLL3.7-X（S1、S2、S3、U1、U2）小鼠巨噬细胞干扰模型 | 第44-46页 |
| 2.1.1 干扰片段合链以及双酶切慢病毒干扰载体pLL3.7 空质粒结果 | 第44-45页 |
| 2.1.2 重组慢病毒质粒转染HEK 293 FT细胞 | 第45页 |
| 2.1.3 检测小鼠巨噬细胞RAW264.7 中目的基因的干扰效果 | 第45-46页 |
| 2.2 构建pLEX-SUMO1和pLEX-SUMO2/3 小鼠巨噬细胞过表达模型 | 第46-48页 |
| 2.2.1 PCR扩增SUMO-1 和SUMO-2/3 基因以及双酶切pLEX-MCS质粒空载体 | 第46-47页 |
| 2.2.2 重组慢病毒质粒转染HEK 293 FT细胞 | 第47-48页 |
| 2.2.3 实时荧光定量检测重组慢病毒在小鼠巨噬细胞RAW264.7 中的表达 | 第48页 |
| 2.3 类泛素SUMO-1/2/3 和偶联酶Ubc-9 在布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞过程中的作用 | 第48-52页 |
| 2.3.1 CFU计数 | 第48-50页 |
| 2.3.2 流式细胞仪检测小鼠细胞凋亡率 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 3.1 类泛素化修饰机制对布鲁氏菌胞内生存的影响 | 第52-53页 |
| 3.2 类泛素化修饰机制对细胞凋亡的影响 | 第53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 实验三 布鲁氏菌 16M脂多糖LPS、缺失株对小鼠巨噬细胞中类泛素SUMO-1、偶联酶Ubc-9 表达的影响 | 第54-62页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| 1.1 细胞和菌株 | 第55页 |
| 1.2 主要试剂 | 第55页 |
| 1.3 仪器 | 第55页 |
| 1.4 方法 | 第55-57页 |
| 1.4.1 培养布鲁氏菌 16M、布鲁氏菌 16M VirB2缺失株 | 第55页 |
| 1.4.2 布鲁氏菌 16M 脂多糖 LPS 的提取 | 第55-56页 |
| 1.4.3 培养小鼠巨噬细胞RAW264.7 | 第56页 |
| 1.4.4 布鲁氏菌 16 M脂多糖LPS对小鼠巨噬细胞中类泛素SUMO-1 和偶联酶Ubc-9 表达的影响 | 第56页 |
| 1.4.5 布鲁氏菌 16M VirB2缺失株侵染对小鼠巨噬细胞中类泛素SUMO-1 和偶联酶Ubc-9表达的影响 | 第56页 |
| 1.4.6 Western Blotting、qRT-PCR技术检测细胞中SUMO-1、Ubc-9 表达量 | 第56-57页 |
| 2 结果 | 第57-60页 |
| 2.1 布鲁氏菌 16 M脂多糖LPS对小鼠巨噬细胞中SUMO-1、Ubc-9 表达的影响 | 第57-58页 |
| 2.2 布鲁氏菌 16M-△VirB2毒力基因缺失株对小鼠巨噬细胞中SUMO-1 和Ubc-9 表达的影响 | 第58-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 第三章 实验结论 | 第62-63页 |
| 创新点 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 附件 | 第73页 |
