| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-38页 |
| 1.1 MiRNA的生物起源 | 第18-22页 |
| 1.1.1 MiRNA的转录 | 第18页 |
| 1.1.2 MiRNA的微加工 | 第18-20页 |
| 1.1.3 MiRNA的切割 | 第20页 |
| 1.1.4 MiRNA的调控 | 第20-22页 |
| 1.2 MiRNA的作用机制和场所 | 第22-28页 |
| 1.2.1 MiRNA对靶基因的识别 | 第22-23页 |
| 1.2.2 MiRNPs的重要组成 | 第23-25页 |
| 1.2.3 MiRNA介导基因沉默的机制 | 第25-27页 |
| 1.2.4 MiRNA抑制基因表达的场所 | 第27-28页 |
| 1.3 MiRNA RT-qPCR检测方法 | 第28-29页 |
| 1.3.1 茎环RT-qPCR法 | 第28页 |
| 1.3.2 Poly(A)加尾法 | 第28-29页 |
| 1.3.3 S-Poly(T)法 | 第29页 |
| 1.4 乳腺脂肪酸代谢 | 第29-33页 |
| 1.4.1 脂肪酸从头合成 | 第31页 |
| 1.4.2 脂肪酸的摄取与激活 | 第31页 |
| 1.4.3 内质网中甘油三酯的形成 | 第31-32页 |
| 1.4.4 脂滴形成与分泌 | 第32页 |
| 1.4.5 调控脂肪酸合成的关键转录因子 | 第32-33页 |
| 1.5 MiRNA与乳腺脂肪酸代谢 | 第33-35页 |
| 1.6 MiR-26 家族研究进展 | 第35-37页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 第二章 山羊miR-26 家族生物信息学分析及其与乳成分和乳脂肪酸成分的相关性研究 | 第38-52页 |
| 2.1 材料与方法 | 第39-43页 |
| 2.1.1 试验动物及样品采集 | 第39页 |
| 2.1.2 主要试验试剂及仪器设备 | 第39页 |
| 2.1.3 MiR-26 家族生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 2.1.4 总RNA提取及实时荧光定量 | 第40-43页 |
| 2.1.5 羊奶成分测定 | 第43页 |
| 2.1.6 羊奶脂肪酸提取与成分分析 | 第43页 |
| 2.1.7 数据分析 | 第43页 |
| 2.2 结果 | 第43-49页 |
| 2.2.1 MiR-26 家族保守性分析 | 第43-44页 |
| 2.2.2 MiR-26 家族靶基因GO富集分析 | 第44-45页 |
| 2.2.3 MiR-26 家族靶基因KEGG通路富集分析 | 第45-46页 |
| 2.2.4 MiR-26 家族与其宿主基因在不同泌乳期表达谱分析 | 第46页 |
| 2.2.5 乳腺组织中miR-26 与其宿主基因家族相关性分析 | 第46-47页 |
| 2.2.6 MiR-26 及其宿主基因家族与乳成分相关性分析 | 第47-48页 |
| 2.2.7 MiR-26 与其宿主基因家族与乳脂肪酸成分相关性分析 | 第48-49页 |
| 2.3 讨论 | 第49-50页 |
| 2.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 山羊miR-26 家族对脂肪酸代谢的协同调控作用研究 | 第52-65页 |
| 3.1 材料与方法 | 第52-56页 |
| 3.1.1 主要试验试剂及仪器设备 | 第52-53页 |
| 3.1.2 细胞培养与小RNA转染 | 第53页 |
| 3.1.3 总RNA提取及实时荧光定量 | 第53-54页 |
| 3.1.4 蛋白提取及Western blot | 第54页 |
| 3.1.5 油红O染色及甘油三酯含量检测 | 第54页 |
| 3.1.6 细胞内脂肪酸含量的测定 | 第54-55页 |
| 3.1.7 荧光素酶活性检测 | 第55页 |
| 3.1.8 亚硫酸氢盐测序PCR | 第55-56页 |
| 3.1.9 数据处理 | 第56页 |
| 3.2 结果 | 第56-63页 |
| 3.2.1 MiR-26 家族超表达效果检测 | 第56-57页 |
| 3.2.2 MiR-26 家族超表达对甘油三酯及脂滴积累的影响 | 第57-58页 |
| 3.2.3 MiR-26 家族超表达对细胞内脂肪酸成分的影响 | 第58-59页 |
| 3.2.4 MiR-26 家族超表达对脂代谢相关基因表达量的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.5 MiR-26 家族靶向INSIG1基因的研究 | 第60-61页 |
| 3.2.6 MiR-26 家族对脂代谢相关基因DNA甲基化水平的影响 | 第61-63页 |
| 3.3 讨论 | 第63-64页 |
| 3.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第四章 山羊miR-26 及其宿主基因家族对脂肪酸代谢的共同调控作用研究 | 第65-76页 |
| 4.1 材料与方法 | 第65-67页 |
| 4.1.1 主要试验试剂及仪器设备 | 第65-66页 |
| 4.1.2 细胞培养与小RNA转染 | 第66页 |
| 4.1.3 总RNA提取及实时荧光定量 | 第66页 |
| 4.1.4 蛋白提取及Western blot | 第66页 |
| 4.1.5 油红O染色及甘油三酯含量检测 | 第66页 |
| 4.1.6 细胞内脂肪酸含量的测定 | 第66页 |
| 4.1.7 荧光素酶活性检测 | 第66-67页 |
| 4.1.8 数据处理 | 第67页 |
| 4.2 结果 | 第67-73页 |
| 4.2.1 MiR-26 家族及宿主基因抑制效果检测 | 第67-68页 |
| 4.2.2 MiR-26 家族及其宿主基因对脂滴及甘油三酯的共同调控作用研究 | 第68-69页 |
| 4.2.3 MiR-26 家族及其宿主基因对脂肪酸成分的共同调控作用研究 | 第69-71页 |
| 4.2.4 MiR-26 家族及其宿主基因对脂代谢相关基因共同调控作用研究 | 第71-73页 |
| 4.2.5 MiR-26 家族直接靶向INSIG1 | 第73页 |
| 4.3 讨论 | 第73-75页 |
| 4.4 结论 | 第75-76页 |
| 第五章 山羊miR-26a启动子与脂代谢重要转录因子的关系研究 | 第76-93页 |
| 5.1 材料与方法 | 第76-81页 |
| 5.1.1 主要试验试剂及仪器设备 | 第76-77页 |
| 5.1.2 山羊miR-26a基因启动子的克隆及生物信息学分析 | 第77-79页 |
| 5.1.3 山羊miR-26a基因启动子及结合位点缺失突变载体构建 | 第79-80页 |
| 5.1.4 启动子荧光素酶报告载体瞬时转染 | 第80页 |
| 5.1.5 荧光素酶活性检测 | 第80页 |
| 5.1.6 总RNA提取及实时荧光定量 | 第80-81页 |
| 5.1.7 亚硫酸氢盐测序PCR | 第81页 |
| 5.1.8 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 第81页 |
| 5.1.9 数据统计与分析 | 第81页 |
| 5.2 结果 | 第81-90页 |
| 5.2.1 山羊miR-26a基因启动子的克隆 | 第81-82页 |
| 5.2.2 山羊miR-26a基因启动子的生物信息学分析 | 第82-84页 |
| 5.2.3 超表达SREBP1、PPARG和LXRA对miR-26a及CTDSP2/L基因表达水平的影响 | 第84-85页 |
| 5.2.4 超表达SREBP1、PPARG和LXRA对miR-26a启动子甲基化水平的影响 | 第85-86页 |
| 5.2.5 PPARG对miR-26a启动子活性的影响 | 第86-87页 |
| 5.2.6 SREBP对miR-26a启动子活性的影响 | 第87-89页 |
| 5.2.7 LXRA对miR-26a启动子活性的影响 | 第89-90页 |
| 5.3 讨论 | 第90-91页 |
| 5.4 本章小结 | 第91-93页 |
| 第六章 山羊miR-26b启动子与脂代谢重要转录因子的关系研究 | 第93-105页 |
| 6.1 材料与方法 | 第93-96页 |
| 6.1.1 主要试验试剂及仪器设备 | 第93页 |
| 6.1.2 山羊miR-26b基因启动子的克隆及生物信息学分析 | 第93页 |
| 6.1.3 山羊miR-26b基因启动子及结合位点突变载体构建 | 第93-95页 |
| 6.1.4 启动子荧光素酶报告载体瞬时转染 | 第95页 |
| 6.1.5 荧光素酶活性检测 | 第95页 |
| 6.1.6 总RNA提取及实时荧光定量 | 第95页 |
| 6.1.7 亚硫酸氢盐测序PCR | 第95页 |
| 6.1.8 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 第95页 |
| 6.1.9 数据统计与分析 | 第95-96页 |
| 6.2 结果 | 第96-102页 |
| 6.2.1 山羊miR-26b基因启动子的克隆 | 第96页 |
| 6.2.2 山羊miR-26b基因启动子的生物信息学分析 | 第96-97页 |
| 6.2.3 超表达SREBP1、PPARG和LXRA对miR-26b及CTDSP1基因表达水平的影响 | 第97-98页 |
| 6.2.4 超表达SREBP1、PPARG和LXRA对miR-26b启动子甲基化水平的影响 | 第98-99页 |
| 6.2.5 PPARG对miR-26b启动子活性的影响 | 第99-100页 |
| 6.2.6 SREBP1和LXRA对miR-26b启动子活性的影响 | 第100-102页 |
| 6.3 讨论 | 第102-104页 |
| 6.4 本章小结 | 第104-105页 |
| 结论 | 第105-106页 |
| 创新 点 | 第106-107页 |
| 存在问题及展望 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-122页 |
| 附录 | 第122-126页 |
| 作者简介 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
