| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 miRNA的概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 miRNA及产生过程 | 第11-12页 |
| 1.1.2 miRNA的调控机理 | 第12-13页 |
| 1.2 植物病害防御中miRNA的研究进展 | 第13-19页 |
| 1.2.1 miRNA介导的病害防御机制 | 第14-15页 |
| 1.2.2 植物病害防御中的miRNA | 第15-19页 |
| 1.3 植物miRNA功能的研究策略 | 第19-21页 |
| 1.3.1 miRNA靶基因的获得 | 第19-20页 |
| 1.3.2 miRNA功能的验证 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 番茄中与病害密切相关miRNA的挖掘及特性分析 | 第22-33页 |
| 2.1 实验材料及试剂 | 第22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂及仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 收集病害相关的miRNA | 第22页 |
| 2.2.2 病害相关miRNA序列的获得及靶基因预测 | 第22-23页 |
| 2.2.3 病害密切相关miRNA的筛选 | 第23页 |
| 2.2.4 病害密切相关miRNA的靶基因功能分析 | 第23页 |
| 2.2.5 病害密切相关miRNA的启动子分析 | 第23页 |
| 2.2.6 病害密切相关miRNA的实时定量PCR验证 | 第23-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-31页 |
| 2.3.1 病害相关的miRNA | 第25-26页 |
| 2.3.2 病害密切相关miRNA的靶基因预测及筛选 | 第26-28页 |
| 2.3.3 病害密切相关miRNA的靶基因功能分析 | 第28-29页 |
| 2.3.4 病害密切相关miRNA的启动子分析 | 第29页 |
| 2.3.5 病害密切相关miRNA的实时定量PCR验证 | 第29-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 3 miR482b和miR6024及二者靶基因的表达特性分析 | 第33-41页 |
| 3.1 实验材料及试剂 | 第33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 实验试剂及仪器 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 miR482b和miR6024的生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 3.2.2 番茄与病原菌的培养及收集 | 第34页 |
| 3.2.3 miR482b和miR6024及二者靶基因的表达特性分析 | 第34-36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.3.1 提取的番茄组织RNA | 第36-37页 |
| 3.3.2 miR482b和miR6024的组织特异性分析 | 第37页 |
| 3.3.3 miR482b和miR6024的靶基因在致病疫霉处理下的表达特性分析 | 第37-38页 |
| 3.3.4 miR482b和miR6024及二者靶基因在SA处理下的表达特性分析 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 3.5 小结 | 第40-41页 |
| 4 MIR482b和MIR6024基因的克隆及植物表达载体的构建 | 第41-51页 |
| 4.1 实验材料及试剂 | 第41页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.1.2 实验试剂及仪器 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-47页 |
| 4.2.1 番茄材料的培养及提取基因组DNA | 第41-42页 |
| 4.2.2 MIR482b和MIR6024基因的克隆 | 第42-46页 |
| 4.2.3 MIR482b和MIR6024过表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 4.3.1 提取的番茄基因组DNA | 第47-48页 |
| 4.3.2 MIR482b和MIR6024基因的克隆结果 | 第48-49页 |
| 4.3.3 构建的MIR482b和MIR6024植物表达载体 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50页 |
| 4.5 小结 | 第50-51页 |
| 5 miR482b和miR6024的功能研究 | 第51-64页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第51页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 5.1.2. 实验试剂及仪器 | 第51页 |
| 5.2 实验方法 | 第51-56页 |
| 5.2.1 根癌农杆菌工程菌的获得 | 第51-52页 |
| 5.2.2 miR482b和miR6024在番茄中的瞬时表达 | 第52-53页 |
| 5.2.3 miR482b和miR6024在番茄中的稳定表达 | 第53-54页 |
| 5.2.4 番茄再生植株的分子检测 | 第54-55页 |
| 5.2.5 miR482b转基因阳性番茄的抗性检测 | 第55-56页 |
| 5.3 结果与分析 | 第56-62页 |
| 5.3.1 根癌农杆菌工程菌的检测结果 | 第56页 |
| 5.3.2 miR482b和miR6024及二者靶基因的瞬时表达特性分析 | 第56-57页 |
| 5.3.3 瞬时表达miR482b和miR6024番茄叶片的抗性检测结果 | 第57-58页 |
| 5.3.4 稳定表达及转基因阳性植株的筛选 | 第58-60页 |
| 5.3.5 转基因阳性植株的抗性检测结果 | 第60-62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-63页 |
| 5.5 小结 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附录A 培养基配方 | 第72-73页 |
| 附录B 论文中所用质粒图谱 | 第73-74页 |
| 附录C MIR482b和MIR6024基因序列 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
