| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第16-31页 |
| 1.1 向日葵及向日葵黄萎病 | 第16-17页 |
| 1.1.1 我国向日葵种植情况 | 第16页 |
| 1.1.2 向日葵黄萎病的危害 | 第16页 |
| 1.1.3 向日葵黄萎病症状 | 第16-17页 |
| 1.2 向日葵黄萎病病原菌 | 第17-20页 |
| 1.2.1 向日葵黄萎病菌的生物学特性 | 第17页 |
| 1.2.2 向日葵黄萎病菌的生活史 | 第17-18页 |
| 1.2.3 微菌核的形成机制 | 第18-19页 |
| 1.2.4 向日葵黄萎病菌的致病机制 | 第19-20页 |
| 1.3 cAMP信号途径 | 第20-22页 |
| 1.4 真菌的遗传转化 | 第22-27页 |
| 1.4.1 传统的真菌遗传转化 | 第22-23页 |
| 1.4.2 农杆菌介导的真菌转化 | 第23-24页 |
| 1.4.3 农杆菌介导的真菌转化的优点 | 第24页 |
| 1.4.4 影响ATMT转化的因素 | 第24-26页 |
| 1.4.5 ATMT法在真菌上的应用 | 第26-27页 |
| 1.5 侧翼序列克隆技术 | 第27-29页 |
| 1.5.1 质粒拯救技术 | 第27页 |
| 1.5.2 反向PCR技术 | 第27页 |
| 1.5.3 TAIL-PCR和hiTAIL-PCR技术 | 第27-29页 |
| 1.6 α-1,6-甘露糖转移酶 | 第29-30页 |
| 1.7 芳香基醇脱氢酶 | 第30-31页 |
| 1.8 研究目的和意义 | 第31页 |
| 2 环腺苷酸对向日葵大丽轮枝菌生物学特性及致病力的影响 | 第31-38页 |
| 2.1 材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 菌株及植物品种 | 第31页 |
| 2.1.2 试剂 | 第31页 |
| 2.1.3 培养基 | 第31-32页 |
| 2.2 方法 | 第32-33页 |
| 2.2.1 向日葵大丽轮枝菌菌落形态及生长速率的测定 | 第32页 |
| 2.2.2 向日葵大丽轮枝孢菌产孢量的测定 | 第32页 |
| 2.2.3 向日葵大丽轮枝孢菌分生孢子萌发率的测定 | 第32页 |
| 2.2.4 向日葵大丽轮枝孢菌分生孢子附着胞观察 | 第32页 |
| 2.2.5 向日葵大丽轮枝孢菌微菌核形成数量的检测 | 第32-33页 |
| 2.2.6 向日葵大丽轮枝孢菌分泌的粗毒素量的测定 | 第33页 |
| 2.2.7 向日葵大丽轮枝孢菌致病力的测定 | 第33页 |
| 2.3 数据分析 | 第33-34页 |
| 2.4 结果与分析 | 第34-37页 |
| 2.4.1 cAMP对向日葵大丽轮枝孢菌落形态的影响 | 第34页 |
| 2.4.2 cAMP对向日葵大丽轮枝孢生长速度和产孢量的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.3 cAMP后对分生孢子萌发率和附着胞形成的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.4 cAMP对向日葵大丽轮枝孢微菌核形成的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.5 cAMP对向日葵大丽轮枝孢产毒能力和致病力的影响 | 第37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-38页 |
| 3 向日葵大丽轮枝菌T-DNA突变体库的建立 | 第38-45页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 供试菌株及质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 试剂和抗生素 | 第38页 |
| 3.1.3 仪器和设备 | 第38页 |
| 3.1.4 培养基 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39-43页 |
| 3.2.1 大肠杆菌的转化 | 第39页 |
| 3.2.2 阳性克隆检测 | 第39-40页 |
| 3.2.3 质粒的扩增和提取 | 第40-41页 |
| 3.2.4 农杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 3.2.5 农杆菌的转化 | 第41页 |
| 3.2.6 菌液PCR | 第41页 |
| 3.2.7 向日葵大丽轮枝菌的遗传转化 | 第41-42页 |
| 3.2.8 突变体单菌落的获得 | 第42页 |
| 3.2.9 突变体的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.10 向日葵大丽轮枝菌阳性转化子潮霉素抗性稳定性检测 | 第43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-45页 |
| 3.3.1 向日葵大丽轮枝菌突变体的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.2 阳性转化子潮霉素抗性的稳定性检测 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45页 |
| 4 向日葵大丽轮枝菌突变体的表型鉴定 | 第45-51页 |
| 4.1 材料 | 第45页 |
| 4.1.1 菌株 | 第45页 |
| 4.1.2 培养基 | 第45页 |
| 4.2 方法 | 第45-46页 |
| 4.2.1 阳性转化子菌落形态及生长速率的测定 | 第45-46页 |
| 4.2.2 阳性转化子产孢量的测定 | 第46页 |
| 4.2.3 阳性转化子粗毒素分泌量的测定 | 第46页 |
| 4.2.4 阳性转化子致病力的测定 | 第46页 |
| 4.3 数据分析 | 第46页 |
| 4.4 结果与分析 | 第46-49页 |
| 4.4.1 阳性转化子菌落形态的观察 | 第46-47页 |
| 4.4.2 阳性转化子生长速率的测定 | 第47页 |
| 4.4.3 阳性转化子产孢量的测定 | 第47-48页 |
| 4.4.4 阳性转化子产毒能力的比较 | 第48-49页 |
| 4.4.5 阳性转化子致病力的测定 | 第49页 |
| 4.5 讨论 | 第49-51页 |
| 5 向日葵大丽轮枝菌突变体侧翼序列的获得和分析 | 第51-61页 |
| 5.1 材料 | 第51页 |
| 5.2 方法 | 第51-55页 |
| 5.2.1 阳性转化子DNA的提取 | 第51页 |
| 5.2.2 hiTAIL-PCR扩增T-DNA插入位点的侧翼序列 | 第51-54页 |
| 5.2.3 目的片段的回收 | 第54页 |
| 5.2.4 目的片段的连接 | 第54页 |
| 5.2.5 大肠杆菌的转化 | 第54-55页 |
| 5.2.6 阳性克隆的检测与测序 | 第55页 |
| 5.2.7 测序结果分析 | 第55页 |
| 5.3 结果与分析 | 第55-61页 |
| 5.3.1 hiTAIL-PCR扩增结果 | 第55页 |
| 5.3.2 侧翼序列分析 | 第55-61页 |
| 5.4 讨论 | 第61页 |
| 6 大丽轮枝菌VdOCH1基因的克隆与功能研究 | 第61-81页 |
| 6.1 材料 | 第61-62页 |
| 6.1.1 菌株、质粒及植物品种 | 第61-62页 |
| 6.1.2 试剂和抗生素 | 第62页 |
| 6.1.3 仪器设备 | 第62页 |
| 6.1.4 培养基 | 第62页 |
| 6.2 方法 | 第62-72页 |
| 6.2.1 构建载体 | 第62-69页 |
| 6.2.2 农杆菌转化 | 第69-70页 |
| 6.2.3 转化子的筛选 | 第70页 |
| 6.2.4 VdOCH1基因的RT-PCR | 第70-71页 |
| 6.2.5 突变体表型分析 | 第71-72页 |
| 6.2.6 细胞壁完整性的检测 | 第72页 |
| 6.2.7 敲除突变体和互补突变体入侵能力检测 | 第72页 |
| 6.2.8 敲除突变体和互补突变体粗毒素分泌量的测定 | 第72页 |
| 6.2.9 致病力的测定 | 第72页 |
| 6.3 数据分析 | 第72页 |
| 6.4 结果与分析 | 第72-81页 |
| 6.4.1 载体的验证 | 第72-73页 |
| 6.4.2 RT-PCR验证敲除突变体 | 第73-74页 |
| 6.4.3 VdOCH1对菌落形态的影响 | 第74页 |
| 6.4.4 VdOCH1对生长速率的影响 | 第74-75页 |
| 6.4.5 VdOCH1对分生孢子的形成及萌发能力的影响 | 第75-78页 |
| 6.4.6 VdOCH1对细胞壁完整性的影响 | 第78-79页 |
| 6.4.7 VdOCH1对入侵能力的影响 | 第79页 |
| 6.4.8 VdOCH1对粗毒素分泌量的影响 | 第79-80页 |
| 6.4.9 VdOCH1对致病力的影响 | 第80-81页 |
| 6.5 讨论 | 第81页 |
| 7 大丽轮枝菌VdAAD基因的克隆与功能研究 | 第81-91页 |
| 7.1 材料 | 第81-82页 |
| 7.1.1 菌株、质粒及植物品种 | 第81-82页 |
| 7.1.2 试剂和抗生素 | 第82页 |
| 7.1.3 仪器设备 | 第82页 |
| 7.1.4 培养基 | 第82页 |
| 7.2 方法 | 第82-85页 |
| 7.2.1 构建载体 | 第82-84页 |
| 7.2.2 农杆菌转化 | 第84页 |
| 7.2.3 转化子的筛选 | 第84页 |
| 7.2.4 VdAAD基因的RT-PCR | 第84-85页 |
| 7.2.5 突变体表型分析 | 第85页 |
| 7.2.6 粗毒素含量的测定 | 第85页 |
| 7.2.7 致病力的测定 | 第85页 |
| 7.3 数据分析 | 第85页 |
| 7.4 结果与分析 | 第85-90页 |
| 7.4.1 互补载体的验证 | 第85-86页 |
| 7.4.2 RT-PCR验证互补突变体 | 第86页 |
| 7.4.3 VdAAD对大丽轮枝菌菌落形态的影响 | 第86-87页 |
| 7.4.4 VdAAD对大丽轮枝菌生长速率影响 | 第87-88页 |
| 7.4.5 VdAAD对大丽轮枝菌分生孢子形成和萌发的影响 | 第88-89页 |
| 7.4.6 VdAAD基因对大丽轮枝菌粗毒素分泌量的影响 | 第89页 |
| 7.4.7 VdAAD对大丽轮枝菌致病力的影响 | 第89-90页 |
| 7.5 讨论 | 第90-91页 |
| 8 全文结论 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-110页 |
| 附录 | 第110-115页 |
| 作者简介 | 第115页 |
