| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 常用缩写词 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-27页 |
| 1.1 猪细小病毒病毒样粒子的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.1.1 VLPs及其免疫机制 | 第16-17页 |
| 1.1.2 PPV-VLPs的研究现况 | 第17-20页 |
| 1.1.3 展望 | 第20页 |
| 1.2 细胞穿膜肽的研究进展 | 第20-26页 |
| 1.2.1 细胞穿膜肽的发现及应用 | 第21-23页 |
| 1.2.2 细胞穿膜肽的分类 | 第23-25页 |
| 1.2.3 HSV-1 VP22细胞穿膜肽的研究进展 | 第25页 |
| 1.2.4 展望 | 第25-26页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第26-27页 |
| 第二章 细胞穿膜肽VP22对生物膜穿透性的研究 | 第27-42页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第28-29页 |
| 2.2.2 目的基因的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.3 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.4 蛋白EGFP-VP22、VP22-EGFP及EGFP的原核表达 | 第31-33页 |
| 2.2.5 蛋白EGFP-VP22、VP22-EGFP及EGFP的Western Blot检测 | 第33-34页 |
| 2.2.6 蛋白EGFP-VP22、VP22-EGFP及EGFP对Vero细胞的毒性分析 | 第34-35页 |
| 2.2.7 融合蛋白EGFP-VP22和VP22-EGFP体外穿膜实验 | 第35页 |
| 2.2.8 数据统计 | 第35页 |
| 2.3 结果 | 第35-40页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.2 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.3 重组蛋白的诱导表达及表达形式分析 | 第37-38页 |
| 2.3.4 重组蛋白的大量表达及纯化结果 | 第38页 |
| 2.3.5 重组蛋白的Western Blot检测 | 第38-39页 |
| 2.3.6 融合蛋白的的细胞毒性检测 | 第39-40页 |
| 2.3.7 融合蛋白的体外穿膜实验 | 第40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 VP22短肽融合猪细小病毒样粒子的制备及鉴定 | 第42-63页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第42页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第43页 |
| 3.2 方法 | 第43-53页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第43-44页 |
| 3.2.2 PPV基因组的提取 | 第44页 |
| 3.2.3 PPV VP2基因的扩增 | 第44页 |
| 3.2.4 PPV VP2基因克隆载体的构建 | 第44页 |
| 3 2.5 VP2-VP22基因的扩增 | 第44-46页 |
| 3.2.6 VP22-VP2基因的扩增 | 第46页 |
| 3.2.7 重组转移质粒pFB-VP22-VP2、pFB-VP2-VP22及pFB-VP2的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.8 重组杆粒Bacmid-VP22-VP2、Bacmid-VP2-VP22及Bacmid-VP2的构建及鉴定 | 第47-49页 |
| 3.2.9 重组杆状病毒的制备 | 第49-52页 |
| 3.2.10 重组蛋白的表达及检测 | 第52-53页 |
| 3.3 结果 | 第53-61页 |
| 3.3.1 PPV VP2基因的扩增 | 第53-54页 |
| 3.3.2 重组转移质粒pFB-VP22-VP2、pFB-VP2-VP22及pFB-VP2的构建与鉴定 | 第54页 |
| 3.3.3 重组杆粒的构建与PCR的鉴定 | 第54-56页 |
| 3.3.4 重组杆状病毒的制备 | 第56-57页 |
| 3.3.5 重组杆状病毒的滴度测定 | 第57页 |
| 3.3.6 重组杆状病毒的PCR鉴定 | 第57-58页 |
| 3.3.7 重组蛋白SDS-PAGE分析 | 第58-59页 |
| 3.3.8 重组蛋白的Western Blot检测 | 第59页 |
| 3.3.9 重组蛋白的免疫荧光检测 | 第59-61页 |
| 3.3.10 电镜观察病毒粒子的包装情况 | 第61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 猪细小病毒样粒子及融合蛋白免疫原性的评价 | 第63-73页 |
| 4.1 材料 | 第63-64页 |
| 4.1.1 主要材料及试剂 | 第63页 |
| 4.1.2 实验动物 | 第63页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第63-64页 |
| 4.2 方法 | 第64-67页 |
| 4.2.1 免疫原的纯化及鉴定 | 第64页 |
| 4.2.2 疫苗制备 | 第64-65页 |
| 4.2.3 小鼠免疫试验 | 第65页 |
| 4.2.4 抗体水平的检测 | 第65-66页 |
| 4.2.5 细胞因子水平的检测 | 第66页 |
| 4.2.6 数据统计 | 第66-67页 |
| 4.3 结果 | 第67-71页 |
| 4.3.1 免疫原的纯化 | 第67页 |
| 4.3.2 酶标二抗和血清最佳稀释倍数 | 第67页 |
| 4.3.3 免疫小鼠血清PPV抗体检测结果 | 第67-69页 |
| 4.3.4 小鼠血清细胞因子水平的检测结果 | 第69-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 附录 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第86页 |
