| 符号说明 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12页 |
| 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 猪流感病毒概况 | 第13-14页 |
| 1.2 猪流感病毒流行病学 | 第14页 |
| 1.3 猪流感病毒（SIV）的生物学特性 | 第14-20页 |
| 1.3.1 猪流感病毒（SIV）的基因结构 | 第14-15页 |
| 1.3.2 猪流感病毒（SIV）蛋白的特性 | 第15-19页 |
| 1.3.2.1 血凝素蛋白（HA） | 第16-17页 |
| 1.3.2.2 神经氨酸酶（NA） | 第17-18页 |
| 1.3.2.3 核蛋白（NP） | 第18页 |
| 1.3.2.4 基脂蛋白 | 第18页 |
| 1.3.2.5 聚合酶蛋白 | 第18-19页 |
| 1.3.2.6 非结构蛋白 | 第19页 |
| 1.3.3 猪流感病毒的复制 | 第19-20页 |
| 1.4 猪流感的检测和诊断方法 | 第20-23页 |
| 1.4.1 猪流感病毒的临床诊断方法 | 第20页 |
| 1.4.2 猪流感的病理学诊断方法 | 第20-21页 |
| 1.4.3 猪流感病毒的实验室检测方法 | 第21-23页 |
| 1.4.3.1 猪流感病毒分离鉴定 | 第21页 |
| 1.4.3.2 SIV的血清学诊断方法 | 第21-22页 |
| 1.4.3.2.1 血凝（HA）和血凝抑制试验（HI） | 第21-22页 |
| 1.4.3.2.2 神经氨酸酶抑制试验 | 第22页 |
| 1.4.3.2.3 酶联免疫吸附试验 | 第22页 |
| 1.4.3.2.4 琼脂扩散试验 | 第22页 |
| 1.4.3.3 SIV分子生物学诊断方法 | 第22-23页 |
| 1.4.3.3.1 RT-PCR试验 | 第22-23页 |
| 1.4.3.3.2 Real-Time PCR试验 | 第23页 |
| 1.4.3.3.3 基因芯片技术 | 第23页 |
| 1.4.3.3.4 荧光抗体试验（IF） | 第23页 |
| 1.5 猪流感的预防与治疗 | 第23-24页 |
| 1.6 流感病毒单克隆抗体技术 | 第24页 |
| 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 2.材料与方法 | 第25-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 毒株 | 第25页 |
| 2.1.2 细胞 | 第25页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要试剂及配制 | 第26-29页 |
| 2.1.5.1 试剂 | 第26页 |
| 2.1.5.2 试剂配制 | 第26-27页 |
| 2.1.5.3 ELISA相关溶液配制 | 第27-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 抗原制备 | 第29页 |
| 2.2.2 动物免疫 | 第29-30页 |
| 2.2.3 间接ELISA方法建立 | 第30-31页 |
| 2.2.3.1 ELISA操作程序： | 第30页 |
| 2.2.3.2 抗原包被浓度和血清稀释度确定 | 第30页 |
| 2.2.3.3 抗原包被浓度和血清稀释度确定 | 第30-31页 |
| 2.2.3.4 封闭液及封闭时间对比实验 | 第31页 |
| 2.2.3.5 一抗作用时间确定 | 第31页 |
| 2.2.3.6 酶标二抗最佳稀释浓度及作用时间确定 | 第31页 |
| 2.2.3.7 特异性试验 | 第31页 |
| 2.2.4 小鼠抗体水平检测 | 第31-32页 |
| 2.2.5 细胞制备与饲养 | 第32-33页 |
| 2.2.5.1 SP2/0 细胞的复苏与培养 | 第32页 |
| 2.2.5.2 饲养细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.5.3 脾细胞的制备 | 第33页 |
| 2.2.6 细胞融合 | 第33-34页 |
| 2.2.7 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第34页 |
| 2.2.8 阳性杂交瘤细胞株的克隆 | 第34-35页 |
| 2.2.9 单克隆抗体的腹水制备 | 第35页 |
| 2.2.10 HI试验 | 第35页 |
| 2.2.11 单克隆抗体亚类鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.12 间接免疫荧光法检测单抗 | 第36-38页 |
| 2.2.12.1 细胞免疫荧光步骤 | 第36页 |
| 2.2.12.2 HA质粒构建 | 第36-37页 |
| 2.2.12.3 HA质粒抽提 | 第37页 |
| 2.2.12.4 HA真核转染 | 第37-38页 |
| 2.2.13 交叉反应试验 | 第38页 |
| 2.2.14 杂交瘤细胞株稳定性试验 | 第38-39页 |
| 3.结果和分析 | 第39-51页 |
| 3.1 抗原制备 | 第39页 |
| 3.2 全病毒间接ELISA方法建立 | 第39-45页 |
| 3.2.1 抗原包被浓度以及血清稀释度的确定 | 第39-40页 |
| 3.2.2 封闭液的选择 | 第40-41页 |
| 3.2.3 封闭时间选择 | 第41-42页 |
| 3.2.4 一抗最佳作用时间选择 | 第42-43页 |
| 3.2.5 酶标二抗稀释度确定 | 第43-44页 |
| 3.2.6 酶标二抗作用时间确定 | 第44-45页 |
| 3.2.7 ELISA特异性试验 | 第45页 |
| 3.3 动物免疫 | 第45-46页 |
| 3.4 单克隆杂交瘤细胞株命名及筛选 | 第46-47页 |
| 3.5 单克隆抗体效价的测定 | 第47页 |
| 3.6 HI试验 | 第47-48页 |
| 3.7 单克隆抗体亚类鉴定 | 第48页 |
| 3.8 病毒间接免疫荧光试验 | 第48-49页 |
| 3.9 HA真核表达免疫荧光试验 | 第49页 |
| 3.10 单抗交叉反应性试验 | 第49-50页 |
| 3.11 杂交瘤细胞株稳定性试验 | 第50-51页 |
| 4.讨论 | 第51-53页 |
| 4.1 抗原纯化与免疫 | 第51页 |
| 4.2 全病毒ELISA方法的建立 | 第51页 |
| 4.3 细胞融合 | 第51-53页 |
| 5.结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
