| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 上篇 文献综述 | 第17-53页 |
| 第一章 由病原菌引起的大豆根部病害研究进展 | 第17-37页 |
| 1 大豆根腐病 | 第17-27页 |
| 1.1 大豆镰孢根腐病 | 第18-22页 |
| 1.2 大豆疫霉根腐病 | 第22-24页 |
| 1.3 大豆立枯病 | 第24-25页 |
| 1.4 大豆炭腐病 | 第25-27页 |
| 2 大豆红冠腐病 | 第27-30页 |
| 参考文献 | 第30-37页 |
| 第二章 大豆根部病害诊断技术研究进展 | 第37-53页 |
| 1 传统的检测方法 | 第37-40页 |
| 1.1 大豆根部病原菌分离 | 第38-40页 |
| 1.1.1 病原真菌分离 | 第38页 |
| 1.1.2 大豆疫霉分离 | 第38-39页 |
| 1.1.3 立枯丝核菌分离 | 第39页 |
| 1.1.4 冬青丽赤壳菌分离 | 第39-40页 |
| 1.2 病原菌属的鉴定 | 第40页 |
| 2 免疫学法 | 第40-41页 |
| 3 分子技术 | 第41-47页 |
| 3.1 DNA探针技术 | 第41页 |
| 3.2 随机扩增多态性DNA技术 | 第41-42页 |
| 3.3 限制性片段长度多态性 | 第42页 |
| 3.4 扩增片段长度多态性 | 第42-43页 |
| 3.5 聚合酶链式反应技术 | 第43-44页 |
| 3.6 实时荧光定量PCR技术 | 第44-45页 |
| 3.7 环介导等温扩增技术 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 下篇 研究内容 | 第53-125页 |
| 第一章 环介导等温扩增技术诊断由5种常见镰孢菌引起的大豆镰孢根腐病 | 第53-83页 |
| 第一节 以CYP51C为靶标基因建立检测尖镰孢菌、木贼镰孢菌和禾谷镰孢菌的LAMP技术体系 | 第55-69页 |
| 1 材料与方法 | 第56-61页 |
| 1.1 供试菌株 | 第56页 |
| 1.2 菌株培养及菌丝粉制备 | 第56页 |
| 1.3 实验所需试剂、仪器与耗材 | 第56-58页 |
| 1.4 基因组DNA的提取 | 第58页 |
| 1.4.1 菌丝基因组DNA提取 | 第58页 |
| 1.4.2 人工接种发病植物组织DNA提取 | 第58页 |
| 1.5 LAMP引物设计与合成 | 第58-60页 |
| 1.6 LAMP反应体系 | 第60-61页 |
| 1.7 LAMP扩增产物判断方法 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-69页 |
| 2.1 LAMP检测体系的特异性验证 | 第61-66页 |
| 2.1.1 CYP51C-Fo-LAMP体系特异性验证 | 第61-63页 |
| 2.1.2 CYP51C-Fe-LAMP体系特异性验证 | 第63-64页 |
| 2.1.3 CYP51C-Fg-LAMP体系特异性验证 | 第64-66页 |
| 2.2 3个LAMP检测体系的灵敏度验证 | 第66-67页 |
| 2.3 3个LAMP技术检测人工接种发病的大豆病组织中的病原菌 | 第67-69页 |
| 2.4 3个LAMP技术检测田间发病的大豆病组织中的病原菌 | 第69页 |
| 第二节 以TEF-1α为靶标基因建立检测茄腐镰孢菌、层出镰孢菌LAMP检测技术体系 | 第69-79页 |
| 3 材料与方法 | 第70-72页 |
| 3.1 供试菌株 | 第70页 |
| 3.2 菌株培养及菌丝粉制备 | 第70页 |
| 3.3 基因组DNA的提取 | 第70页 |
| 3.4 LAMP引物设计与合成 | 第70-72页 |
| 4 结果与分析 | 第72-79页 |
| 4.1 TEF-1α-Fs-LAMP与TEF-1α-Fp-LAMP检测体系的特异性验证 | 第72-76页 |
| 4.1.1 TEF-1α-Fs-LAMP体系特异性验证 | 第72-74页 |
| 4.1.2 TEF-1α-Fp-LAMP体系特异性验证 | 第74-76页 |
| 4.2 TEF-1α-Fs-LAMP与TEF-1α-Fp-LAMP检测体系的灵敏度验证 | 第76-77页 |
| 4.3 TEF-1α-Fs-LAMP与TEF-1α-Fp-LAMP检测体系检测人工接种发病的大豆病组织中的病原菌 | 第77-79页 |
| 4.4 TEF-1α-Fs-LAMP与TEF-1α-Fp-LAMP检测技术体系检测田间发病的大豆病组织中的病原菌 | 第79页 |
| 本章讨论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-83页 |
| 第二章 环介导等温扩增技术快速诊断大豆立枯病与大豆炭腐病 | 第83-99页 |
| 1 材料与方法 | 第85-88页 |
| 1.1 供试菌株 | 第85页 |
| 1.2 菌株培养及菌丝粉制备 | 第85页 |
| 1.3 实验所需试剂、仪器与耗材 | 第85页 |
| 1.4 基因组DNA的提取 | 第85-86页 |
| 1.5 LAMP引物设计与合成 | 第86-87页 |
| 1.6 LAMP反应体系 | 第87页 |
| 1.7 LAMP扩增产物判断方法 | 第87-88页 |
| 2 结果与分析 | 第88-94页 |
| 2.1 ITS-Rs-LAMP体系与ITS-Mp-LAMP体系的特异性验证 | 第88-91页 |
| 2.1.1 ITS-Rs-LAMP体系特异性验证 | 第88-89页 |
| 2.1.2 ITS-Mp-LAMP体系特异性验证 | 第89-91页 |
| 2.2 ITS-Rs-LAMP体系与ITS-Mp-LAMP体系的灵敏度验证 | 第91-92页 |
| 2.3 ITS-Rs-LAMP与ITS-Mp-LAMP技术检测人工接种发病的大豆病组织中的病原菌 | 第92-93页 |
| 2.4 ITS-Rs-LAMP与ITS-Mp-LAMP技术检测田间发病的大豆病组织中的病原菌 | 第93-94页 |
| 3 讨论 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-99页 |
| 第三章 适用于在田间快速诊断大豆红冠腐病的LAMP检测技术体系的研发 | 第99-115页 |
| 第一节 大豆红冠腐病LAMP诊断技术的研发 | 第100-107页 |
| 1 材料与方法 | 第101-104页 |
| 1.1 供试菌株 | 第101-102页 |
| 1.2 菌株培养及菌丝粉制备 | 第102页 |
| 1.3 实验所需试剂、仪器与耗材 | 第102-103页 |
| 1.4 基因组DNA的提取 | 第103页 |
| 1.5 LAMP引物设计与合成 | 第103页 |
| 1.6 LAMP反应体系 | 第103页 |
| 1.7 LAMP扩增产物判断方法 | 第103-104页 |
| 2 结果与分析 | 第104-107页 |
| 2.1 TUB-Ci-LAMP体系的特异性验证 | 第104-105页 |
| 2.2.1 TUB-Ci-LAMP体系不同地区分离的冬青丽赤壳菌菌株的特异性验证 | 第104页 |
| 2.2.2 TUB-Ci-LAMP体系对大豆根部其他常见病原菌以及其他真菌的特异性验证 | 第104-105页 |
| 2.2 TUB-Ci-LAMP体系的灵敏度验证 | 第105-106页 |
| 2.3 TUB-Ci-LAMP技术检测人工接种发病的大豆病组织中的冬青丽赤壳菌 | 第106-107页 |
| 第二节 适用于田间快速诊断大豆红冠腐病的LAMP诊断技术体系的改进 | 第107-111页 |
| 3 材料与方法 | 第107-109页 |
| 3.1 实验所需仪器 | 第107页 |
| 3.2 从人工接种的发病大豆病组织中提取基因组DNA一步法 | 第107页 |
| 3.3 用保温杯完成LAMP反应的操作程序 | 第107-108页 |
| 3.4 适用于田间现场快速诊断的LAMP检测简化操作 | 第108页 |
| 3.5 LAMP检测简化操作与保温杯提供热源相结合条件下的检测灵敏度 | 第108-109页 |
| 4 结果与分析 | 第109-111页 |
| 4.1 简化LAMP检测操作与用保温杯提供恒温热源完成LAMP反应对检测灵敏度的影响 | 第109页 |
| 4.2 以一步法提取的大豆病组织DNA为模板进行LAMP检测的结果 | 第109-110页 |
| 4.3 适用于田间快速诊断大豆红冠腐病的LAMP检测技术集成 | 第110-111页 |
| 本章讨论 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-115页 |
| 第四章 基于环介导等温扩增技术高遥量检测大豆根部9种重要病原菌研究 | 第115-125页 |
| 1 材料与方法 | 第117-119页 |
| 1.1 用于高通量集成的9个LAMP检测技术体系 | 第117-118页 |
| 1.2 9个LAMP检测体系与96孔板结合的高通量检测设计及方法 | 第118页 |
| 1.3 LAMP检测结果判定 | 第118页 |
| 1.4 大豆根部病组织DNA的提取 | 第118-119页 |
| 2 结果与分析 | 第119-123页 |
| 2.1 9个大豆根部病原菌LAMP检测体系与96孔板相结合的高通量检测集成 | 第119-121页 |
| 2.2 高通量检测设计体系方案的改进及其在大豆根部病害诊断的应用验证 | 第121-123页 |
| 3 讨论 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-125页 |
| 全文总结 | 第125-127页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及申请的专利 | 第127-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
