| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第9-13页 |
| 第一章 免疫检查点PD-1 的概念及研究进展 | 第13-19页 |
| 1.1 程序性细胞死亡蛋白1的概念及介绍 | 第13-14页 |
| 1.2 PD-1 负调控T细胞活性的机制 | 第14-15页 |
| 1.3 阻断PD-1 信号通路的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4 本课题研究的内容及创新点 | 第17-19页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第17页 |
| 1.4.2 创新点 | 第17-19页 |
| 第二章 构建高水平稳定表达PD-1 抗体的T细胞 | 第19-33页 |
| 2.1 实验材料及试剂、仪器设备 | 第19-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 实验所需引物 | 第20页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 pNBS328-anti-PD-1 质粒的构建 | 第22-25页 |
| 2.2.2 电转获得稳定表达PD-1 抗体的T细胞 | 第25页 |
| 2.2.3 PIK-PD1T细胞中PD-1 抗体表达量的检测 | 第25-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-31页 |
| 2.3.1 pNBS328-anti-PD1结构示意图及质粒构建结果 | 第28-29页 |
| 2.3.2 T细胞上清中PD-1 抗体的表达量 | 第29-30页 |
| 2.3.3 PIK-PD1 T细胞分泌的PD-1 抗体重链的鉴定 | 第30页 |
| 2.3.4 RT-PCR检测PD-1 抗体在T细胞基因组中的表达水平 | 第30-31页 |
| 2.4 结果分析和讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 阻断PD-1 信号通路提高T细胞的活性和功能 | 第33-40页 |
| 3.1 实验器材 | 第33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第33页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 流式检测PIK-PD1 T细胞表面的免疫检查点 | 第33-34页 |
| 3.2.2 CCK8检测PIK-PD1 T细胞的增殖 | 第34页 |
| 3.2.3 流式检测PIK-PD1 T细胞的活化，衰老和记忆标记 | 第34-35页 |
| 3.2.4 流式检测PIK-PD1T细胞、Mock T细胞CD3+CD8+T细胞的百分比 | 第35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-38页 |
| 3.3.1 PD-1 抗体封闭活化T细胞表面的免疫检查点 | 第35-36页 |
| 3.3.2 PD-1 抗体促进T细胞的增殖 | 第36-37页 |
| 3.3.3 流式检测PIK-PD1 T细胞的表型 | 第37-38页 |
| 3.3.4 PIK-PD1细胞中CD3+CD8+细胞的百分比 | 第38页 |
| 3.4 结果分析与讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 构建表达PD-1 抗体的HerinCAR-T细胞 | 第40-48页 |
| 4.1 实验器材 | 第40-41页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第40-41页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 4.2.1 pNBS328-PD1-HerinCAR质粒的构建 | 第42页 |
| 4.2.2 电转获得表达PD-1 抗体的HerinCAR-T细胞 | 第42-43页 |
| 4.2.3 PD1-HerinCAR-T细胞中PD-1 抗体表达量的检测 | 第43-44页 |
| 4.3 实验结果 | 第44-46页 |
| 4.3.1 pNBS328-PD1-HerinCAR结构示意图及质粒构建结果 | 第44-45页 |
| 4.3.2 PD1-HerinCAR-T细胞中PD-1 抗体和CAR表达量的检测 | 第45-46页 |
| 4.3.3 RT-PCR检测PD-1 抗体和HerinCAR基因在PD1-HerinCAR-T细胞中的表达水平 | 第46页 |
| 4.4 结果分析和讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 PD1-HerinCAR-T细胞的功能分析 | 第48-59页 |
| 5.1 实验器材 | 第48-49页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第48页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第48页 |
| 5.1.4 主要试剂的配制 | 第48-49页 |
| 5.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 5.2.1 流式检测肺癌细胞受IFN-?刺激后PD-L1的表达 | 第49-50页 |
| 5.2.2 流式检测各种肿瘤细胞HER2，EGFR抗原的表达 | 第50页 |
| 5.2.3 检测PD1-HerinCAR-T细胞对肺癌细胞的体外杀伤能力 | 第50页 |
| 5.2.4 流式检测PD1-HerinCAR-T细胞与H460共培养后细胞因子的分泌 | 第50-51页 |
| 5.2.5 检测PD1-HerinCAR-T细胞表面的免疫检查点 | 第51页 |
| 5.2.6 PD1-HerinCAR-T治疗H460小鼠移植瘤模型的体内实验 | 第51-52页 |
| 5.3 实验结果 | 第52-58页 |
| 5.3.1 IFN-?刺激后肿瘤细胞表面PD-L1的表达 | 第52-53页 |
| 5.3.2 各肿瘤细胞株HER2和EGFR抗原的流式检测结果 | 第53-54页 |
| 5.3.3 实时监测系统检测PD1-HerinCAR-T细胞对肿瘤细胞株的杀伤作用 | 第54-56页 |
| 5.3.4 PD1-HerinCAR -T细胞与NCI-H460共培养后细胞因子的分泌量 | 第56页 |
| 5.3.5 PD1-HerinCAR-T细胞表面的免疫检查点 | 第56-57页 |
| 5.3.6 PD1-HerinCAR-T抑制NCI-H460小鼠移植瘤的生长 | 第57-58页 |
| 5.4 结果分析和讨论 | 第58-59页 |
| 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
