| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 PCV2病原学与致病性 | 第11-16页 |
| 1.1.1 PCV2病毒的理化特性 | 第11页 |
| 1.1.2 PCV2的分型 | 第11-12页 |
| 1.1.3 PCV2基因组结构 | 第12页 |
| 1.1.4 PCV2致病机理 | 第12-13页 |
| 1.1.5 危害与致病性 | 第13-14页 |
| 1.1.6 PCV2疫苗研究 | 第14-16页 |
| 1.2 猪圆环病毒检测方法 | 第16-17页 |
| 1.2.1 常规PCR | 第16页 |
| 1.2.2 荧光定量PCR | 第16页 |
| 1.2.3 间接免疫荧光实验 | 第16页 |
| 1.2.4 酶联免疫吸附实验 | 第16-17页 |
| 1.2.5 免疫组织化学方法 | 第17页 |
| 1.3 VLPs与大肠杆菌表达载体系统概述 | 第17-19页 |
| 1.3.1 VLPs研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.2 大肠杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 PCV2 Cap蛋白的表达与病毒样颗粒组装 | 第20-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-21页 |
| 2.1.1 细胞与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第21页 |
| 2.2.2 PCV序列比较分析 | 第21页 |
| 2.2.3 构建重组质粒 | 第21-24页 |
| 2.2.4 重组蛋白的表达与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.5 蛋白的表达与纯化 | 第25-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.3.1 酶切验证重组质粒 | 第27页 |
| 2.3.2 重组蛋白的表达产物的分析 | 第27-28页 |
| 2.3.3 重组蛋白纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.4 电镜观察 | 第29-30页 |
| 2.3.5 间接免疫荧光 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-33页 |
| 第三章 感染性克隆的构建与病毒拯救 | 第33-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-34页 |
| 3.1.1 细胞,质粒 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂与材料 | 第33页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第33-34页 |
| 3.2 方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第34页 |
| 3.2.2 PK-15细胞复苏 | 第34-35页 |
| 3.2.3 重组质粒pSP72-PCV2-IF-M1、pSP72-PCV2-IF-M2的构建 | 第35-37页 |
| 3.2.4 重组质粒转染PK-15细胞 | 第37页 |
| 3.2.5 重组病毒的形态观察 | 第37-38页 |
| 3.2.6 病毒拷贝数的测定 | 第38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-40页 |
| 3.3.1 酶切验证重组质粒 | 第38-39页 |
| 3.3.2 重组病毒电镜观察 | 第39页 |
| 3.3.3 病毒数拷贝数的测定 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简历 | 第54页 |