| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 抗菌肽的研究进展 | 第13-21页 |
| 1.1 抗菌肽的概述 | 第13-21页 |
| 1.1.1 抗菌肽的分类 | 第14页 |
| 1.1.2 抗菌肽的理化性质 | 第14-16页 |
| 1.1.3 抗菌肽的作用机理 | 第16-18页 |
| 1.1.4 抗菌肽的基因工程研究 | 第18-19页 |
| 1.1.5 抗菌肽在畜牧业中的应用 | 第19-20页 |
| 1.1.6 面临的问题 | 第20-21页 |
| 2 猪源抗菌肽Cecropin P1 | 第21-23页 |
| 2.1 Cecropin P1的结构 | 第21页 |
| 2.2 Cecropin P1的抗菌机理 | 第21-23页 |
| 第二部分 试验研究 | 第23-71页 |
| 第一章 抗菌肽Cecropin P1目的基因的人工合成 | 第23-34页 |
| 1 试验材料 | 第23-25页 |
| 1.1 菌株和载体 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 溶液配置 | 第24页 |
| 1.4 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2 试验方法 | 第25-31页 |
| 2.1 CP1目的基因设计 | 第25-26页 |
| 2.2 引物设计 | 第26页 |
| 2.3 CP1目的基因的人工合成 | 第26-27页 |
| 2.3.1 初级延伸反应 | 第26页 |
| 2.3.2 次级延伸反应 | 第26-27页 |
| 2.4 目的基因的克隆及鉴定 | 第27-31页 |
| 2.4.1 CP1目的基因的回收 | 第27页 |
| 2.4.2 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.4.3 CP1目的基因与载体质粒的连接 | 第28-29页 |
| 2.4.4 重组质粒转化至宿主菌DH5α | 第29页 |
| 2.4.5 重组质粒的鉴定 | 第29-31页 |
| 3 试验结果 | 第31-32页 |
| 3.1 CP1目的基因的人工合成 | 第31页 |
| 3.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3 测序鉴定 | 第32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第二章 重组表达质粒pCold TF-CP1的构建 | 第34-44页 |
| 1 试验材料 | 第34-36页 |
| 1.1 菌株和载体 | 第34页 |
| 1.2 主要试剂 | 第34-35页 |
| 1.3 溶液配制 | 第35页 |
| 1.4 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2 试验方法 | 第36-41页 |
| 2.1 CP1目的基因的制备 | 第36-37页 |
| 2.2 原核表达载体pCold TF基因片段的制备 | 第37页 |
| 2.3 CP1目的基因与表达载体的连接 | 第37-38页 |
| 2.4 重组质粒转化至DH5α | 第38页 |
| 2.5 重组质粒的鉴定 | 第38-41页 |
| 2.5.1 重组质粒抽提 | 第38-39页 |
| 2.5.2 菌落PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 2.5.3 重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 2.5.4 重组质粒的测序鉴定 | 第41页 |
| 3 试验结果 | 第41-42页 |
| 3.1 菌落PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2 酶切鉴定结果 | 第42页 |
| 3.3 测序鉴定结果 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 重组质粒工程菌的诱导表达 | 第44-57页 |
| 1 试验材料 | 第44-47页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂 | 第44-45页 |
| 1.3 溶液配制 | 第45-46页 |
| 1.4 主要仪器 | 第46-47页 |
| 2 试验方法 | 第47-51页 |
| 2.1 重组质粒工程菌的诱导表达 | 第47-48页 |
| 2.1.1 重组质粒工程菌的制备 | 第47页 |
| 2.2.2 重组表达工程菌的初步表达 | 第47-48页 |
| 2.2.3 SDS-PAGE电泳检测 | 第48页 |
| 2.2 重组表达蛋白的可溶性检测 | 第48-49页 |
| 2.3 诱导表达的时间选择 | 第49页 |
| 2.4 诱导剂的浓度选择 | 第49页 |
| 2.5 重组表达蛋白的免疫印迹分析(Western-blot) | 第49-51页 |
| 2.5.1 蛋白质样品制备 | 第49页 |
| 2.5.2 SDS-PAGE电泳 | 第49-50页 |
| 2.5.3 Western-blot杂交检测 | 第50-51页 |
| 3 试验结果 | 第51-55页 |
| 3.1 重组质粒工程菌的初步表达 | 第51-52页 |
| 3.2 重组表达蛋白的可溶性鉴定 | 第52页 |
| 3.3 诱导表达时间的优化 | 第52-53页 |
| 3.4 IPTG工作浓度优化 | 第53-54页 |
| 3.5 重组表达蛋白免疫印迹分析 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 抗菌肽CP1的释放及抑菌活性检测 | 第57-71页 |
| 1 试验材料 | 第57-59页 |
| 1.1 菌株 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂 | 第57-58页 |
| 1.3 溶液配制 | 第58页 |
| 1.4 主要仪器 | 第58-59页 |
| 2 试验方法 | 第59-61页 |
| 2.1 融合蛋白的处理 | 第59-60页 |
| 2.1.1 融合蛋白纯化 | 第59-60页 |
| 2.1.2 融合蛋白除盐浓缩 | 第60页 |
| 2.2 融合蛋白rCP1的切割 | 第60-61页 |
| 2.3 Tricine-SDS-PAGE | 第61页 |
| 2.4 酶切产物的活性检测 | 第61页 |
| 2.5 酶切产物的分析 | 第61页 |
| 3 试验结果 | 第61-69页 |
| 3.1 融合蛋白rCP1的纯化 | 第61-62页 |
| 3.2 融合蛋白的浓缩 | 第62-63页 |
| 3.3 融合蛋白的切割 | 第63-64页 |
| 3.4 酶切产物的活性检测 | 第64-66页 |
| 3.5 酶切产物的分析 | 第66-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 总结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第80页 |
