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小麦泛素系统关键组分基因TaUb2和TaPUB1的功能分析

中文摘要第1-15页
Abstract第15-18页
1 前言第18-31页
   ·泛素/26S蛋白酶体系统第18-24页
     ·泛素第19-20页
     ·泛素活化酶第20页
     ·泛素结合酶第20页
     ·泛素连接酶第20-23页
     ·26S蛋白酶体第23-24页
   ·UPS与非生物胁迫耐性第24-26页
     ·泛素(Ub)在非生物胁迫中的作用第24页
     ·U-box与非生物胁迫耐性第24-26页
   ·UPS与生物胁迫第26-28页
     ·泛素与生物胁迫第27页
     ·U-box与生物胁迫第27-28页
   ·UPS与植物的生长发育第28-30页
     ·泛素对植物生长发育的影响第28页
     ·U-box蛋白与植物激素对植物生长发育的调控第28-30页
   ·本研究的目的意义第30-31页
2 材料与方法第31-49页
   ·实验材料第31-33页
     ·植物材料第31页
     ·材料的培养和处理第31页
       ·小麦的培养和处理第31页
       ·烟草的培养及处理第31页
     ·菌株和质粒第31页
     ·酶与各种生化试剂第31页
     ·PCR引物第31-33页
   ·实验方法第33-49页
     ·利用Trizol试剂盒提取RNA第33-34页
     ·反转录cDNA第一条链的合成第34页
     ·CTAB法提取植物基因组DNA第34-35页
     ·3′RACE第35-37页
     ·真核表达载体的构建第37页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第37-38页
     ·转化菌落PCR鉴定第38页
     ·质粒的提取第38页
     ·目的片段和质粒DNA的酶切鉴定第38-39页
     ·目的片段与质粒DNA的连接第39页
     ·根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备和转化第39-40页
       ·根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备第39页
       ·冻融法转化根癌农杆菌LBA4404第39-40页
     ·TaPUB1::GFP融合蛋白亚细胞定位第40-41页
     ·农杆菌介导的植物转化第41-42页
     ·转基因植株的PCR检测第42-43页
     ·荧光定量PCR检测基因的表达第43页
     ·蛋白杂交分析第43-46页
     ·生理指标的测定第46-47页
     ·植物对病原菌抗性分析第47-48页
     ·统计分析第48-49页
3 结果与分析第49-79页
   ·TaUb2过表达烟草对病原菌的抗性第49-54页
     ·TaUb2过表达烟草对Pst DC3000抗性的表型观察第49-50页
     ·TaUb2过表达改变了烟草叶片气孔对Pst DC3000的响应第50-51页
     ·Pst DC3000感染对转基因烟草抗氧化方面的影响第51-52页
     ·Pst DC3000使转基因烟草发生ROS迸发并诱导HR反应第52-53页
     ·Pst DC3000感染诱发疾病相关基因的表达第53-54页
   ·小麦U-box基因Ta PUB1的分离及序列特征分析第54-57页
     ·小麦U-box基因TaPUB1的分离第54-55页
     ·TaPUB1全长cDNA及编码蛋白质序列的特征分析第55-56页
     ·TaPUB1序列系统发生分析第56-57页
   ·TaPUB1的亚细胞定位第57-58页
   ·TaPUB1基因在小麦中的表达模式分析第58-60页
     ·TaPUB1基因在小麦不同器官中的表达模式第58页
     ·小麦中TaPUB1基因表达水平对不同逆境胁迫处理的响应第58-60页
     ·TaPUB1基因表达对激素的响应模式第60页
   ·TaPUB1抗体制备第60-62页
     ·原核表达载体pET-TaPUB1的构建第60-61页
     ·TaPUB1蛋白表达及抗体获得第61-62页
   ·TaPUB1基因在本生烟中的遗传转化第62-64页
     ·35S::TaPUB1真核表达载体的构建第62-63页
     ·转TaPUB1本生烟阳性植株的筛选第63-64页
   ·过表达TaPUB1本生烟的耐盐性分析第64-73页
     ·过表达TaPUB1对盐胁迫下本生烟种子萌发及幼苗生长的影响第64-65页
     ·过表达TaPUB1对盐胁迫下成苗期本生烟耐盐性的影响第65-68页
     ·盐胁迫对野生型和过表达本生烟渗透调节能力及Na+、K+的影响第68-69页
     ·过量表达TaPUB1增强了转基因本生烟的抗氧化能力第69-73页
   ·过表达TaPUB1转基因本生烟对其它逆境胁迫的耐性第73-75页
     ·过表达TaPUB1转基因本生烟对水分胁迫的耐性第73-74页
     ·过表达TaPUB1本生烟对重金属胁迫的耐性第74-75页
     ·过表达TaPUB1本生烟对Pst DC3000感染的影响第75页
   ·过表达TaPUB1对转基因植株生长发育的影响第75-79页
4 讨论第79-85页
   ·过表达TaUb2提高了转基因烟草对病原菌的抗性第79-81页
   ·小麦TaPUB1的克隆及其在逆境胁迫耐性中的功能分析第81-85页
5 结论第85-86页
参考文献第86-98页
致谢第98-99页
攻读学位期间发表论文情况第99页

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