| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-21页 |
| 缩略词汇总 | 第21-22页 |
| 1 绪论 | 第22-40页 |
| ·霍乱弧菌 | 第22-26页 |
| ·霍乱弧菌分类 | 第22-23页 |
| ·霍乱弧菌的生物学特性 | 第23页 |
| ·霍乱弧菌的毒理作用和主要毒力因子 | 第23-24页 |
| ·霍乱弧菌流行病学 | 第24页 |
| ·霍乱弧菌检测方法研究进展 | 第24-26页 |
| ·常规检测方法 | 第24-25页 |
| ·免疫学方法 | 第25页 |
| ·分子生物学方法 | 第25-26页 |
| ·副溶血性弧菌 | 第26-29页 |
| ·副溶血性弧菌生物学特性 | 第26页 |
| ·副溶血性弧菌的致病机理及相关基因 | 第26-27页 |
| ·副溶血性弧菌流行病学 | 第27-28页 |
| ·副溶血性弧菌检测方法现阶段研究进展 | 第28-29页 |
| ·常规生化方法 | 第28页 |
| ·免疫学方法 | 第28页 |
| ·分子生物学方法 | 第28-29页 |
| ·沙门氏菌 | 第29-32页 |
| ·沙门氏菌分类 | 第29页 |
| ·沙门氏菌生物学特性 | 第29页 |
| ·沙门氏菌毒力因子 | 第29-30页 |
| ·沙门氏菌流行病学 | 第30页 |
| ·沙门氏菌检测方法研究进展 | 第30-32页 |
| ·常规生化方法 | 第30-31页 |
| ·免疫学方法 | 第31页 |
| ·分子生物学方法 | 第31-32页 |
| ·环介导等温扩增技术（LAMP）概述 | 第32-37页 |
| ·LAMP技术介绍 | 第32-35页 |
| ·LAMP的原理 | 第32-33页 |
| ·LAMP引物设计 | 第33页 |
| ·LAMP技术的特点 | 第33-35页 |
| ·LAMP反应产物鉴定 | 第35页 |
| ·基于钙黄绿素染料的实时可视化LAMP技术介绍 | 第35-36页 |
| ·LAMP技术的应用 | 第36-37页 |
| ·死活菌检测技术研究进展 | 第37-38页 |
| ·死活菌检测现状及相关检测方法 | 第37-38页 |
| ·基于RNA水平的检测 | 第37页 |
| ·基于DNA结合染料的检测 | 第37-38页 |
| ·本论文研究内容及意义 | 第38-40页 |
| ·本论文研究内容 | 第38-39页 |
| ·本论文研究意义 | 第39-40页 |
| 2 食品中霍乱弧菌实时可视化PMA-LAMP方法的建立 | 第40-67页 |
| ·实验材料 | 第40-43页 |
| ·菌株 | 第40-41页 |
| ·仪器设备 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-43页 |
| ·实验方法 | 第43-51页 |
| ·样本的制备 | 第43-44页 |
| ·细菌培养 | 第43页 |
| ·基因组DNA模板的提取 | 第43-44页 |
| ·相关菌液的制备 | 第44页 |
| ·LAMP引物和qPCR引物设计 | 第44页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第44-46页 |
| ·PCR产物回收及纯化 | 第46-47页 |
| ·标准质粒构建 | 第47-48页 |
| ·回收纯化的PCR产物与载体连接 | 第47页 |
| ·转化 | 第47页 |
| ·菌液PCR初步鉴定 | 第47页 |
| ·重组质粒测序与同源性比对分析 | 第47-48页 |
| ·重组质粒提取 | 第48页 |
| ·实时可视化LAMP体系和qPCR体系的建立 | 第48-49页 |
| ·qPCR反应体系的建立 | 第48-49页 |
| ·可视化LAMP反应体系的建立 | 第49页 |
| ·可视化LAMP反应体系的优化 | 第49-50页 |
| ·可视化LAMP体系特异性实验及与qPCR体系的比较 | 第50页 |
| ·可视化LAMP体系灵敏度及与qPCR体系的比较 | 第50页 |
| ·PMA处理条件优化 | 第50-51页 |
| ·实时可视化PMA-LAMP体系的灵敏度及与PMA-qPCR体系的比较30 | 第51页 |
| ·模拟食样实时可视化PMA-LAMP体系与PMA-qPCR体系灵敏度的比较 | 第51页 |
| ·实际样品检测 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-65页 |
| ·标准质粒构建与鉴定 | 第51-53页 |
| ·目的片段电泳鉴定 | 第51-52页 |
| ·标准质粒测序鉴定 | 第52-53页 |
| ·霍乱弧菌可视化LAMP体系优化和建立 | 第53-56页 |
| ·Mg~(2+)终浓度优化 | 第53页 |
| ·甜菜碱终浓度优化 | 第53-54页 |
| ·内外引物浓度比优化 | 第54页 |
| ·钙黄绿素终浓度优化 | 第54-55页 |
| ·Mn~(2+)终浓度优化 | 第55-56页 |
| ·霍乱弧菌可视化LAMP和qPCR分析方法特异性比较 | 第56页 |
| ·霍乱弧菌可视化LAMP和qPCR分析方法灵敏度比较 | 第56-59页 |
| ·PMA浓度优化 | 第59-60页 |
| ·PMA浓度范围初步确定 | 第59页 |
| ·PMA工作浓度优化 | 第59-60页 |
| ·基质中细胞浓度对PMA处理效果的影响 | 第60-62页 |
| ·霍乱弧菌实时可视化PMA-LAMP和PMA-qPCR分析方法灵敏度的比较 | 第62页 |
| ·模拟食样中霍乱弧菌实时可视化PMA-LAMP和PMA-qPCR分析方法灵敏度的比较 | 第62-65页 |
| ·实时可视化PMA-LAMP检测方法在实际样品中的应用 | 第65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 3 食品中副溶血性弧菌实时可视化PMA-LAMP方法的建立 | 第67-83页 |
| ·材料与方法 | 第67-71页 |
| ·实验材料 | 第67-69页 |
| ·菌种 | 第67-68页 |
| ·仪器设备 | 第68页 |
| ·主要试剂 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-71页 |
| ·样本的制备 | 第69页 |
| ·副溶血性弧菌LAMP引物和qPCR引物设计 | 第69页 |
| ·副溶血性弧菌标准质粒的制备 | 第69-70页 |
| ·实时可视化LAMP体系和qPCR体系的建立 | 第70页 |
| ·实时可视化LAMP和qPCR特异性和灵敏度分析 | 第70页 |
| ·PMA浓度优化 | 第70-71页 |
| ·培养基对PMA处理效果的影响 | 第71页 |
| ·PMA处理上限 | 第71页 |
| ·实时可视化PMA-LAMP的灵敏度及与PMA-qPCR的比较 | 第71页 |
| ·实时可视化PMA-LAMP与PMA-qPCR方法模拟食样实验 | 第71页 |
| ·实际样品检测 | 第71页 |
| ·结果与分析 | 第71-81页 |
| ·标准质粒构建与鉴定 | 第72-73页 |
| ·目的片段电泳鉴定 | 第72页 |
| ·标准质粒测序鉴定 | 第72-73页 |
| ·副溶血性弧菌可视化LAMP和qPCR分析方法特异性比较 | 第73页 |
| ·副溶血性弧菌可视化LAMP和qPCR分析方法灵敏度比较 | 第73-76页 |
| ·PMA处理条件优化 | 第76-78页 |
| ·PMA浓度优化 | 第76-77页 |
| ·PMA处理菌液浓度上限 | 第77页 |
| ·不同培养基对PMA处理效果的影响 | 第77-78页 |
| ·副溶血性弧菌实时可视化PMA-LAMP和PMA-qPCR分析方法灵敏度的比较 | 第78页 |
| ·模拟食样中副溶血性弧菌实时可视化PMA-LAMP和PMA-qPCR分析方法灵敏度的比较 | 第78-80页 |
| ·实时可视化PMA-LAMP检测方法在实际样品中的应用 | 第80-81页 |
| ·小结 | 第81-83页 |
| 4 食品中沙门氏菌实时可视化PMA-LAMP方法的建立 | 第83-98页 |
| ·材料与方法 | 第83-87页 |
| ·实验材料 | 第83-84页 |
| ·菌种 | 第83页 |
| ·仪器设备 | 第83-84页 |
| ·实验方法 | 第84-87页 |
| ·样本的制备 | 第84页 |
| ·沙门氏菌LAMP引物和qPCR引物设计 | 第84-85页 |
| ·沙门氏菌标准质粒的制备 | 第85页 |
| ·实时可视化LAMP体系和qPCR体系的建立 | 第85-86页 |
| ·实时可视化LAMP和qPCR特异性和灵敏度分析 | 第86页 |
| ·PMA浓度优化 | 第86页 |
| ·细菌浓度对PMA处理效果的影响 | 第86页 |
| ·实时可视化PMA-LAMP的灵敏度及与PMA-qPCR的比较 | 第86页 |
| ·实时可视化PMA-LAMP与PMA-qPCR方法模拟食样实验 | 第86-87页 |
| ·实际样品检测 | 第87页 |
| ·结果与分析 | 第87-96页 |
| ·标准质粒构建与鉴定 | 第87-88页 |
| ·目的片段电泳鉴定 | 第87页 |
| ·标准质粒测序鉴定 | 第87-88页 |
| ·沙门氏菌可视化LAMP和qPCR分析方法特异性比较 | 第88-89页 |
| ·沙门氏菌可视化LAMP和qPCR分析方法灵敏度比较 | 第89-90页 |
| ·PMA处理条件优化 | 第90-93页 |
| ·PMA浓度优化 | 第90-92页 |
| ·PMA处理菌液浓度上限 | 第92-93页 |
| ·沙门氏菌实时可视化PMA-LAMP和PMA-qPCR分析方法灵敏度的比较 | 第93-94页 |
| ·模拟食样中沙门氏菌实时可视化PMA-LAMP和PMA-qPCR分析方法灵敏度的比较 | 第94-95页 |
| ·实时可视化PMA-LAMP检测方法在实际样品中的应用 | 第95-96页 |
| ·小结 | 第96-98页 |
| 5 讨论 | 第98-100页 |
| ·LAMP引物设计 | 第98页 |
| ·实时LAMP的初步探索 | 第98页 |
| ·样品的前增菌和稀释 | 第98-99页 |
| ·基因组DNA提取 | 第99页 |
| ·钙黄绿素染料的注意事项 | 第99-100页 |
| 6 总结、创新与展望 | 第100-102页 |
| ·总结 | 第100-101页 |
| ·创新点 | 第101页 |
| ·展望 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 作者简历 | 第110-111页 |
