| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| ·苹果在我国的经济地位 | 第12页 |
| ·苹果病毒病概况 | 第12-16页 |
| ·地理分布 | 第13页 |
| ·寄主范围 | 第13-14页 |
| ·危害症状特点 | 第14-15页 |
| ·传播途径 | 第15页 |
| ·病毒基因组特性 | 第15-16页 |
| ·苹果病毒病害的防治 | 第16-17页 |
| ·苹果病毒检测方法研究进展 | 第17-20页 |
| ·目测法 | 第17页 |
| ·指示植物法 | 第17-18页 |
| ·电子显微镜技术检测法 | 第18页 |
| ·血清学方法 | 第18页 |
| ·分子生物学技术 | 第18-20页 |
| 引言 | 第20-22页 |
| 第二章 山东和陕西苹果主要病毒种类的分子鉴定 | 第22-36页 |
| ·试验材料 | 第22-23页 |
| ·供试寄主植物 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·常用实验仪器 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-29页 |
| ·样品总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第24-25页 |
| ·检测引物 | 第25页 |
| ·PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测 | 第25-26页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第26-27页 |
| ·T-载体连接 | 第27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·序列测定与分析 | 第27-28页 |
| ·ACLSV基因组全长扩增 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-33页 |
| ·提取样品总RNA琼脂糖凝胶电泳检测 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·测序结果与分析 | 第31页 |
| ·ACLSV基因组全长分析 | 第31-33页 |
| ·讨论 | 第33-36页 |
| 第三章 我国苹果主要病毒多重RT-PCR检测体系的建立 | 第36-44页 |
| ·材料与方法 | 第36-39页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·单一RT-PCR | 第37页 |
| ·单一RT-PCR产物克隆和重组质粒的提取 | 第37-38页 |
| ·多重RT-PCR | 第38页 |
| ·多重RT-PCR灵敏性测试 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-42页 |
| ·单一RT-PCR测序确认 | 第39页 |
| ·多重RT-PCR优化 | 第39-41页 |
| ·多重RT-PCR灵敏性测试 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 多重RT-PCR检测体系的应用 | 第44-50页 |
| ·材料与方法 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·田间样品 | 第44页 |
| ·样品总RNA提取 | 第44页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第44-45页 |
| ·多重RT-PCR检测 | 第45页 |
| ·单一RT-PCR检测 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-48页 |
| ·多重RT-PCR检测 | 第45-46页 |
| ·病毒复合侵染 | 第46-47页 |
| ·单一RT-PCR检测检验 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 ASGV CP基因原核表达载体构建及诱导表达 | 第50-64页 |
| ·实验材料 | 第50-52页 |
| ·CP基因来源及克隆所用质粒和菌株 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·引物设计 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-58页 |
| ·ASGV CP全长基因的PCR扩增与克隆 | 第52页 |
| ·表达载体和重组载体双酶切 | 第52页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第52-54页 |
| ·CP基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第55-57页 |
| ·融合蛋白的大量表达及纯化回收 | 第57页 |
| ·Bradford法测定纯化蛋白浓度 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-63页 |
| ·ASGV CP全长基因的扩增 | 第58-59页 |
| ·pET-28a(+)和pGEM-ASGV-CP双酶切鉴定 | 第59页 |
| ·pET-28a-ASGV-CP质粒的PCR鉴定 | 第59-60页 |
| ·测序结果 | 第60-61页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达及纯化回收 | 第61-62页 |
| ·纯化蛋白浓度测定 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| 结论与展望 | 第64-68页 |
| 1 结论 | 第64-65页 |
| ·建立了同时检测4种病毒类病原的多重RT-PCR检测体系 | 第64页 |
| ·ACLSV基因组全长扩增 | 第64-65页 |
| ·构建了苹果茎沟病毒外壳蛋白的原核表达载体 | 第65页 |
| ·成功诱导了ASGV CP表达载体的融合表达并纯化回收到目标蛋白 | 第65页 |
| 2 展望 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录A 本论文中所用病毒缩写及中英文对照 | 第74-75页 |
| 附录B 本论文中所用缩写词及中英文对照 | 第75-76页 |
| 附录C 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第76-77页 |
| 附录D 常用试剂的配制 | 第77-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 在学期间发表和已录用论文及参加课题 | 第82页 |
