| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 符号表 | 第8-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-27页 |
| ·猪霍乱沙门菌的危害 | 第13-14页 |
| ·减毒沙门菌疫苗 | 第14-17页 |
| ·减毒沙门菌的主要入侵途径 | 第14-15页 |
| ·沙门菌相关减毒基因 | 第15-17页 |
| ·理想的减毒活疫苗 | 第17页 |
| ·减毒沙门菌载体的研究概况 | 第17-21页 |
| ·减毒沙门菌活载体的优缺点 | 第17-18页 |
| ·减毒沙门菌外源蛋白表达系统 | 第18-19页 |
| ·减毒沙门菌载体的应用 | 第19-21页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第21-27页 |
| ·PRRSV病原学 | 第21-22页 |
| ·PRRSV的基因组结构 | 第22页 |
| ·PRRSV的主要结构蛋白 | 第22-23页 |
| ·PRRSV的致病机理 | 第23页 |
| ·PRRSV诊断与防治策略 | 第23-24页 |
| ·PRRSV疫苗 | 第24-27页 |
| 第2章 猪霍乱沙门菌双缺失株?crp?cya C78-1 的构建与鉴定 | 第27-45页 |
| ·材料 | 第27-31页 |
| ·菌株、质粒及培养条件 | 第27-29页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第29-30页 |
| ·培养基及抗生素的配制 | 第30页 |
| ·主要试剂的配制 | 第30页 |
| ·主要实验器材 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-36页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第31页 |
| ·细菌的活化 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备（Ca Cl2法） | 第31-32页 |
| ·细菌的PCR鉴定 | 第32页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第32-33页 |
| ·目的片段与p MD18-T载体的连接转化 | 第33页 |
| ·质粒提取 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·猪霍乱沙门菌?crp C78-1 株cya基因上下臂片段的克隆与鉴定 | 第34页 |
| ·重组自杀性质粒pRE?cya的构建 | 第34-35页 |
| ·猪霍乱沙门菌双缺失株 ΔcrpΔcya C78-1 的构建 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-42页 |
| ·重组自杀性质粒pRE?cya的构建 | 第36-40页 |
| ·双缺失株 ΔcrpΔcya C78-1 的构建及筛选 | 第40-42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| ·所选菌株及缺失基因的选择 | 第43页 |
| ·重组自杀性质粒的特征 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第3章 猪霍乱沙门菌双缺失株?crp?cya C78-1 生物学特性研究 | 第45-53页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·菌株 | 第45-46页 |
| ·试剂和实验动物 | 第46页 |
| ·主要培养基及试剂的配制 | 第46页 |
| ·主要实验器材 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-47页 |
| ·双缺失株?crp?cya C78-1 的表型鉴定 | 第46页 |
| ·双缺失株?crp?cya C78-1 的遗传稳定性 | 第46页 |
| ·双缺失株?crp?cya C78-1 的的生长特性 | 第46页 |
| ·双缺失株?crp?cya C78-1 的毒力测定的毒力测定 | 第46-47页 |
| ·双缺失株?crp?cya C78-1 的免疫保护试验 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-51页 |
| ·双缺失株?crp?cya C78-1 的表型鉴定 | 第47-48页 |
| ·双缺失株?crp?cya C78-1 的遗传稳定性 | 第48-49页 |
| ·双缺失株?crp?cya C78-1 的生长特性 | 第49-50页 |
| ·双缺失株?crp?cya C78-1 的毒力测定 | 第50-51页 |
| ·双缺失株?crp?cya C78-1 的免疫保护试验 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·cya基因的功能 | 第51页 |
| ·cya基因的缺失对菌株生物学特性的影响 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第4章 猪霍乱沙门菌?crp?cya?asd C78-1 平衡致死系统的构建与鉴定 | 第53-61页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·菌株和质粒 | 第53-54页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第54页 |
| ·主要培养基及抗生素的配制 | 第54页 |
| ·主要试剂的配制 | 第54页 |
| ·主要实验器材 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-57页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第54-55页 |
| ·细菌的活化 | 第55页 |
| ·沙门菌电转感受态的制备 | 第55页 |
| ·猪霍乱沙门菌三缺失株 ΔcrpΔcya?asd C78-1 的构建 | 第55-56页 |
| ·平衡致死系统?crp?cya?asdC78-1（pYA3493）的构建 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-59页 |
| ·猪霍乱沙门菌三缺失株?crp?cya?asdC78-1 的构建与鉴定 | 第57-58页 |
| ·平衡致死系统 ?crp?cya?asdC78-1（p YA3493）的构建与鉴定 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| ·无抗性平衡致死系统 | 第59页 |
| ·asd基因缺失株的筛选 | 第59-60页 |
| ·平衡致死系统在减毒沙门菌中的应用 | 第60-61页 |
| 第5章 减毒猪霍乱沙门菌?crp?cya?asd C78-1（pYA-ORF5-ORF6）的构建与鉴定 | 第61-75页 |
| ·材料 | 第61-63页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·主要试剂的配制 | 第62页 |
| ·主要仪器设备 | 第62页 |
| ·引物设计 | 第62-63页 |
| ·方法 | 第63-68页 |
| ·病料处理 | 第63页 |
| ·总RNA的提取 | 第63页 |
| ·RT-PCR | 第63-64页 |
| ·目的基因与p MD19-T的连接与转化 | 第64-65页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组载体pYA-ORF5-ORF6的构建 | 第66页 |
| ·沙门菌电转感受态的制备 | 第66-67页 |
| ·沙门菌的电转化 | 第67页 |
| ·重组菌?crp?cya?asdC78-1 (pYA-ORF5-ORF6)的鉴定 | 第67-68页 |
| ·ORF5-ORF6基因在重组菌?crp?cya?asd C78-1 中的稳定性检测 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-73页 |
| ·ORF5和ORF6基因的扩增 | 第68-69页 |
| ·重组质粒pMD19-T-ORF5和pMD19-T-ORF6的鉴定 | 第69-70页 |
| ·重组质粒pYA- ORF5-ORF6的酶切鉴定 | 第70-71页 |
| ·ORF5-ORF6双基因融合序列测序结果 | 第71-72页 |
| ·重组菌?crp?cya?asdC78-1 (pYA-ORF5-ORF6)的鉴定 | 第72-73页 |
| ·ORF5-ORF6基因的稳定性检测 | 第73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| 第6章 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第85-86页 |
