| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 符号表 | 第7-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-21页 |
| ·沙门菌综述 | 第11-14页 |
| ·沙门菌及其生物学特性 | 第11-12页 |
| ·沙门菌危害 | 第12-13页 |
| ·沙门菌毒力的决定因素 | 第13-14页 |
| ·细菌LuxS密度感应系统研究进展 | 第14-16页 |
| ·AI-2 信号分子的发现 | 第14-15页 |
| ·AI-2 的合成途径 | 第15页 |
| ·LuxS蛋白结构 | 第15-16页 |
| ·AI-2 的调控功能 | 第16页 |
| ·Ⅵ型分泌系统研究进展 | 第16-21页 |
| ·Ⅵ型分泌系统概述 | 第16-17页 |
| ·T6SS的基因及蛋白结构 | 第17-19页 |
| ·T6SS的功能 | 第19-20页 |
| ·沙门菌中的T6SS | 第20-21页 |
| 第2章 沙门菌毒力因子多重PCR检测方法的建立及应用 | 第21-33页 |
| ·实验材料和方法 | 第21-24页 |
| ·菌株来源 | 第21页 |
| ·试剂、材料和仪器 | 第21页 |
| ·沙门菌筛选引物的设计 | 第21-22页 |
| ·多重PCR引物的设计 | 第22-23页 |
| ·细菌基因组的提取 | 第23页 |
| ·多重PCR检测体系的建立 | 第23页 |
| ·PCR特异性鉴定 | 第23页 |
| ·多重PCR敏感性试验 | 第23-24页 |
| ·多重PCR结果统计 | 第24页 |
| ·耐药实验 | 第24页 |
| ·沙门菌分离株致病力测定 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-31页 |
| ·沙门菌株的鉴定 | 第24-25页 |
| ·沙门菌中T6SS的鉴定 | 第25页 |
| ·多重PCR检测方法的建立 | 第25-26页 |
| ·特异性检测 | 第26页 |
| ·敏感性检测 | 第26-28页 |
| ·沙门菌毒力基因分布情况 | 第28-29页 |
| ·沙门菌耐药性实验 | 第29-30页 |
| ·沙门菌分离株致病力测定 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第3章 沙门菌luxS缺失株的构建及生物学特性研究 | 第33-44页 |
| ·实验材料和方法 | 第33-36页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·主要试剂、材料和仪器 | 第33页 |
| ·PCR引物的设计及合成 | 第33-34页 |
| ·打靶片段的扩增及回收 | 第34页 |
| ·SM52电转感受态的制备及SM52-pKD46的构建 | 第34-35页 |
| ·SM52-pKD46电转感受态的制备及luxS缺失株的构建 | 第35页 |
| ·缺失株Cm片段的去除 | 第35页 |
| ·生长曲线的测定 | 第35页 |
| ·运动性检测 | 第35-36页 |
| ·生物被膜形成能力测定 | 第36页 |
| ·致病性测定 | 第36页 |
| ·菌株对RAW264.7 的黏附入侵实验 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-42页 |
| ·打靶片段的扩增及回收 | 第36-37页 |
| ·SM52-pKD46的构建 | 第37页 |
| ·沙门菌luxS缺失株的构建 | 第37-39页 |
| ·缺失株Cm片段的去除 | 第39页 |
| ·生长曲线的测定 | 第39-40页 |
| ·运动性检测 | 第40页 |
| ·生物被膜形成能力测定 | 第40-41页 |
| ·致病力测定 | 第41页 |
| ·菌株对RAW264.7 的黏附入侵实验 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第4章 密度感应系统LuxS蛋白对T6SS影响的分析 | 第44-53页 |
| ·实验材料和方法 | 第44-47页 |
| ·实验菌株的来源 | 第44页 |
| ·主要试剂、材料和仪器 | 第44页 |
| ·引物的设计 | 第44-45页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白抗体的制备 | 第46页 |
| ·T6SS核心基因的荧光定量PCR检测 | 第46页 |
| ·T6SS核心蛋白Western blot检测 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-51页 |
| ·表达基因片段的PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·pET-28a的提取和酶切 | 第48页 |
| ·重组质粒的构建 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的表达纯化 | 第49页 |
| ·重组蛋白抗体的制备及多抗效果的检测 | 第49页 |
| ·T6SS主要元件的荧光定量PCR检测 | 第49-50页 |
| ·T6SS主要元件Western blot检测 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第5章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 缩略语词汇表 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第63页 |
