| 致谢 | 第1-5页 |
| 目录 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 常用英文缩略表 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 新城疫的分类 | 第11页 |
| 2 新城疫的诊断和流行病学 | 第11-13页 |
| 3.从鸟类分离到的新城疫病毒 | 第13-14页 |
| 4.新城疫病毒的持续感染和传播 | 第14页 |
| 5 新城疫病毒的疫苗接种 | 第14-15页 |
| 6 新城疫病毒的宿主反应 | 第15-16页 |
| 7.新城疫病毒的研究的展望 | 第16页 |
| 8.新城疫诊断技术的研究进展 | 第16-19页 |
| ·NDV 的常规分离与鉴定 | 第16页 |
| ·电镜检测 | 第16页 |
| ·血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI) | 第16-17页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第17页 |
| ·琼脂扩散试验 | 第17页 |
| ·免疫荧光技术 | 第17页 |
| ·RT‐PCR 技术 | 第17-18页 |
| ·单克隆抗体 | 第18-19页 |
| 第一部分 抗鸡新城疫强毒 HN09‐68 株单克隆抗体的制备与鉴定 | 第19-35页 |
| 引言 | 第19页 |
| 1 材料方法 | 第19-26页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·毒株、实验动物、鸡胚与细胞 | 第19页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第19-20页 |
| ·主要试剂的配制 | 第20页 |
| ·细胞培养液的配制 | 第20页 |
| ·ELISA 试剂: | 第20页 |
| ·方法 | 第20-26页 |
| ·病毒抗原制备 | 第20-21页 |
| ·动物免疫 | 第21页 |
| ·间接 ELISA 方法的初步建立 | 第21-22页 |
| ·最佳抗原稀释倍数和血清稀释倍数的确定 | 第21-22页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第22页 |
| ·ELISA 测小鼠的抗体水平 | 第22页 |
| ·细胞融合及阳性杂交瘤细胞的筛选与亚克隆 | 第22-24页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第22页 |
| ·细胞的融合 | 第22-23页 |
| ·杂交瘤细胞的培养与筛选 | 第23-24页 |
| ·杂交瘤细胞的亚克隆 | 第24页 |
| ·腹水的制备 | 第24页 |
| ·杂交瘤分泌的单克隆抗体的初步鉴定 | 第24-26页 |
| ·ELISA 和 HI 效价的测定 | 第24-25页 |
| ·抗体亚型鉴定 | 第25页 |
| ·单抗的特异性鉴定 | 第25页 |
| ·间接免疫荧光试验（IFA） | 第25-26页 |
| ·部分单克隆抗体的中和试验 | 第26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-33页 |
| ·病毒抗原制备 | 第26-27页 |
| ·间接 ELISA 方法的初步建立 | 第27-28页 |
| ·最佳抗原稀释倍数和血清稀释倍数的确定 | 第27页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第27页 |
| ·小鼠抗体水平的测定 | 第27-28页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第28-29页 |
| ·杂交瘤分泌的单克隆抗体的初步鉴定 | 第29-32页 |
| ·腹水的 ELISA 和 HI 效价的测定 | 第29-30页 |
| ·抗体亚型鉴定 | 第30-31页 |
| ·单抗的特异性鉴定 | 第31-32页 |
| ·间接免疫荧光试验（IFA） | 第32页 |
| ·部分单克隆抗体的中和试验 | 第32-33页 |
| 3 小结与讨论 | 第33-35页 |
| 第二部分 新城疫病毒 HN 基因的克隆和截段 HN 蛋白的原核表达 | 第35-52页 |
| 引言 | 第35页 |
| 1 材料与方法 | 第35-45页 |
| ·材料 | 第35-38页 |
| ·毒株、质粒、菌株和鸡胚 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·溶液的配制 | 第36-38页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关试剂的配制 | 第36页 |
| ·细菌培养基的配制 | 第36页 |
| ·SDS‐PAGE 电泳所用试剂 | 第36-38页 |
| ·Western blot 试剂的配制 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-45页 |
| ·技术路线 | 第38-39页 |
| ·截短 HN 基因 ORF 的扩增、克隆、测序 | 第39-43页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·NDV 病毒的增殖、RNA 提取与反转录 | 第39-40页 |
| ·NDV 截短 HN 基因的扩增、优化和克隆 | 第40页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第40-41页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第41页 |
| ·连接产物的转化 | 第41页 |
| ·菌液 PCR 鉴定 | 第41-42页 |
| ·提取重组质粒 | 第42页 |
| ·重组质粒的双酶切 | 第42页 |
| ·序列测定 | 第42-43页 |
| ·新城疫病毒截短 HN 基因的原核表达系统的构建与鉴定 | 第43-44页 |
| ·pMD18‐T‐HN 重组质粒和 pET‐32a(＋) 原核表达质粒的双酶切 | 第43页 |
| ·截短 HN 基因与 pET‐32a(＋)表达载体的连接 | 第43页 |
| ·重组的表达载体质粒转化 BL21(DE3) | 第43页 |
| ·重组的表达载体的菌液 PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·测序 | 第44页 |
| ·重组表达载体 pET‐32a‐HN 的诱导表达与鉴定 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白表达产物 SDS‐PAGE 电泳检测： | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的诱导表达、诱导时间的变化及融合蛋白可溶性分 析 | 第45页 |
| ·融合蛋白的免疫印迹分析（Western blotting） | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-50页 |
| ·目的基因片段的扩增 | 第45-46页 |
| ·PCR 反应的退火温度优化 | 第46页 |
| ·重组质粒 pMD18‐T‐HN 的双酶切及测序 | 第46-47页 |
| ·重组原核表达质粒 pET‐32a‐HN 的 PCR 鉴定以及双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组质粒 pET‐32a‐HN 表达蛋白的 SDS‐PAGE 分析 | 第48-50页 |
| ·SDS‐PAGE 电泳结果及不同的诱导浓度的优化 | 第48-49页 |
| ·SDS‐PAGE 电泳结果及不同的诱导时间的优化 | 第49页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白的免疫印迹分析 | 第50页 |
| 3 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 全文总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-62页 |
| ABSTRACT | 第62-63页 |
