致谢 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
文献综述 | 第10-19页 |
1 病原学 | 第10-12页 |
·PCV2 的发现 | 第10页 |
·PCV2 的形态和理化特性 | 第10页 |
·细胞培养特性 | 第10-11页 |
·PCV2 的传播途径 | 第11页 |
·流行情况 | 第11-12页 |
2 分子生物学特征 | 第12-13页 |
·基因组结构 | 第12页 |
·ORF1 及其编码的蛋白 | 第12-13页 |
·ORF2 及其编码的蛋白 | 第13页 |
·ORF3 及其编码的蛋白 | 第13页 |
3 致病机理 | 第13-15页 |
·免疫刺激 | 第13-14页 |
·免疫抑制 | 第14页 |
·PCV2 的组织嗜向性 | 第14-15页 |
4 PCV2 相关性疾病 | 第15-16页 |
·断奶仔猪多系统衰竭综合症 | 第15页 |
·猪皮炎与肾病综合征 | 第15-16页 |
·繁殖障碍 | 第16页 |
·仔猪先天性震颤 | 第16页 |
·猪呼吸系统综合征 | 第16页 |
5 PCV2 疫苗研究进展 | 第16-19页 |
·灭活疫苗 | 第17-18页 |
·弱毒疫苗 | 第18页 |
·基因工程疫苗 | 第18-19页 |
试验一 猪圆环病毒 2 型毒株分离及全基因序列分析 | 第19-41页 |
1 材料和方法 | 第19-21页 |
·材料 | 第19页 |
·方法 | 第19-21页 |
2 结果 | 第21-39页 |
·套式 PCR 结果 | 第21页 |
·IFA 结果 | 第21-22页 |
·PCR 分段扩增结果 | 第22-23页 |
·PCR 直接扩增结果 | 第23页 |
·测序结果 | 第23-25页 |
·ORF1 基因核苷酸及推导的氨基酸序列同源性分析 | 第25-30页 |
·ORF2 基因核苷酸及推导的氨基酸序列同源性分析 | 第30-33页 |
·ORF3 基因核苷酸及其推导的氨基酸序列同源性分析 | 第33-36页 |
·PCV2 分离株的遗传进化树分析 | 第36-39页 |
3 讨论 | 第39-41页 |
试验二 猪圆环病毒 2 型 ORF2 和 ORF3 基因的原核表达及 ELISA 检测方法的建立 | 第41-63页 |
1. 材料和方法 | 第41-51页 |
·材料 | 第41-44页 |
·方法 | 第44-51页 |
2 结果 | 第51-61页 |
·ORF3 基因 PCR 扩增 | 第51-52页 |
·重组质粒 pET32 -ORF2 和 pET32 -ORF3 的双酶切鉴定 | 第52-53页 |
·重组质粒的序列分析 | 第53页 |
·重组质粒 pET32 -ORFs 在大肠杆菌 BL21 中的诱导表达 | 第53-54页 |
·重组蛋白的可溶性分析 | 第54-55页 |
·重组蛋白的纯化 | 第55-56页 |
·重组蛋白的 Western blot 鉴定 | 第56-57页 |
·重组蛋白浓度测定 | 第57-58页 |
·抗原最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定 | 第58页 |
·二抗最佳稀释倍数的确定 | 第58-59页 |
·判断标准的确定 | 第59-60页 |
·批内重复性试验 | 第60页 |
·批间重复性试验 | 第60-61页 |
·特异性试验 | 第61页 |
·临床样品的检测结果 | 第61页 |
3 讨论 | 第61-63页 |
全文总结 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-69页 |
Abstract | 第69-71页 |
附录:优化后的 ORF2 基因序列 | 第71页 |