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朵丽蝶兰成花关键基因DhCOL的克隆及功能验证

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-7页
目录第7-10页
前言第10-11页
第一章 文献综述第11-18页
   ·高等植物成花诱导光周期途径研究第11-13页
     ·高等植物成花诱导第11页
     ·高等植物的光周期现象第11页
     ·高等植物成花光周期的信号转导第11-13页
   ·蝴蝶兰成花诱导研究进展第13-16页
     ·蝴蝶兰的商业价值第13-14页
     ·蝴蝶兰的成花诱导研究第14-16页
   ·CONSTANS(CO)的研究进展第16-18页
第二章 DhCOL 基因的克隆第18-37页
   ·试验材料第18页
     ·植物材料第18页
     ·主要试剂第18页
     ·感受态菌种和连接载体第18页
     ·主要试验器材第18页
   ·试验方法第18-25页
     ·采样和样品保存第18-19页
     ·总 RNA 的提取第19页
     ·基因组 DNA 的消化第19-20页
     ·RNA 反转录为 cDNA第20-21页
     ·特异性引物设计第21页
     ·RT-PCR 扩增 DhCOL 基因第21-22页
     ·PCR 产物回收第22页
     ·回收产物与载体连接第22页
     ·制备大肠杆菌(TG1)感受态第22-24页
     ·连接产物的转化及阳性克隆筛选第24页
     ·菌检及测序第24页
     ·基因序列生物学信息学分析第24-25页
   ·结果与分析第25-36页
     ·总 RNA 的提取结果第25页
     ·DhCOL 基因的扩增结果第25-26页
     ·基因序列分析第26-27页
     ·蛋白质预测与分析第27-32页
     ·聚类分析第32-33页
     ·同源性分析第33-36页
   ·讨论第36-37页
第三章 不同光周期处理下朵丽蝶兰 DhCOL 和 DhGI1 基因的时空表达第37-52页
   ·试验材料第37页
     ·植物材料第37页
     ·主要试剂第37页
     ·主要试验器材第37页
   ·试验方法第37-42页
     ·采样和样品保存第37-40页
     ·总 RNA 的提取第40页
     ·DNA 消化与 cDNA 的合成第40-41页
     ·引物设计第41页
     ·荧光定量 RT-PCR第41-42页
   ·结果与分析第42-49页
     ·不同光周期下 DhCOL 和 DhGI1 基因昼夜表达分析第42-44页
     ·不同光周期下朵丽蝶兰不同组织中的 DhCOL 和 DhGI1 的表达第44-45页
     ·不同光周期下花部各器官中 DhCOL 和 DhGI1 的表达第45-46页
     ·不同光周期下朵丽蝶兰不同生长阶段顶叶中 DhCOL 和 DhGI1 的表达第46-48页
     ·不同光周期处理下朵丽蝶兰不同大小花苞中 DhCOL 和 DhGI1 的表达第48-49页
   ·讨论和结论第49-52页
     ·不同光周期下 DhCOL 和 DhGI1 昼夜表达第49-50页
     ·不同光周期下 DhCOL 和 DhGI1 在朵丽蝶兰不同生长阶段的表达第50页
     ·不同光周期下 DhCOL 和 DhGI1 不同组织表达第50页
     ·不同光周期下不同大小花苞中 DhCOL 和 DhGI1 的表达第50-51页
     ·不同光周期下花部各器官中 DhCOL 和 DhGI1 的表达第51-52页
第四章 DhCOL 基因植物表达载体的构建及农杆菌介导转化拟南芥第52-67页
   ·试验材料第52页
     ·菌种和载体第52页
     ·主要试剂第52页
     ·主要仪器设备第52页
   ·试验方法第52-61页
     ·质粒提取第52-54页
     ·DhCOL 基因扩增第54-55页
     ·载体及目的片段酶切第55页
     ·酶切产物回收第55页
     ·将载体酶切产物和基因片段酶切产物连接第55-56页
     ·连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆筛选第56页
     ·表达载体第一轮酶切验证第56页
     ·表达载体第二轮酶切验证第56-58页
     ·菌检测序第58页
     ·拟南芥种植与处理第58-59页
     ·浸花法浸染拟南芥第59页
     ·纯合子筛选第59-60页
     ·转基因植株表型观察第60页
     ·基因组水平上检测转基因植株第60页
     ·转录水平上检测转基因植株第60-61页
   ·结果与分析第61-65页
     ·PCR 扩增结果第61页
     ·目的基因片段和 pC1301 载体酶切第61-62页
     ·表达载体酶切验证结果第62-63页
     ·菌检测序第63页
     ·农杆菌菌液保存第63页
     ·转基因植株基因组水平上检测第63-64页
     ·转基因植株在转录水平上检测第64页
     ·DhCOL 转基因植株表型分析第64-65页
   ·讨论第65-67页
     ·pC1301-DhCOL 植物表达载体构建第65页
     ·农杆菌介导转化拟南芥第65-67页
第五章 结论与展望第67-70页
   ·结论第67-68页
     ·DhCOL 的克隆第67页
     ·DhCOL 植物表达载体构建及转化拟南芥第67页
     ·不同光周期处理下朵丽蝶兰中 DhCOL 和 DhGI1 基因的时空表达第67-68页
   ·展望第68-70页
参考文献第70-77页
附录第77-79页
个人简介第79-81页
致谢第81页

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