| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| ·生物钟的研究意义 | 第10页 |
| ·生物钟节律基因调控过程 | 第10-15页 |
| ·昼夜节律信号输入途径 | 第11-12页 |
| ·生物钟中央振荡器 | 第12-14页 |
| ·昼夜节律钟信号输出 | 第14-15页 |
| ·MYB 转录因子 | 第15-17页 |
| ·LHY/CCA1 研究进展 | 第17-18页 |
| ·研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 克隆获得 DHLHY 基因 CDNA 序列全长 | 第19-41页 |
| ·蝴蝶兰 LHY 基因相关序列获得 | 第19-20页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·实验试剂 | 第21页 |
| ·仪器设备及实验器材 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-28页 |
| ·Trizol 法提取总 RNA | 第21-22页 |
| ·消化 DNA | 第22-23页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·克隆获得 cDNA 全长序列 | 第23-27页 |
| ·DhLHY 基因序列生物信息学分析 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-40页 |
| ·叶片总 RNA 的提取 | 第28页 |
| ·DNA 消化结果 | 第28-29页 |
| ·RT‐PCR 结果 | 第29-30页 |
| ·基因序列鉴定 | 第30页 |
| ·cDNA 序列分析 | 第30-31页 |
| ·功能结构域分析 | 第31-32页 |
| ·同源基因氨基酸序列分析 | 第32-35页 |
| ·进化树的构建 | 第35-37页 |
| ·DhLHY 基因编码蛋白预测及分析 | 第37-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 DHLHY 基因的时空表达 | 第41-51页 |
| ·试验材料 | 第41页 |
| ·植物材料 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·仪器设备 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-45页 |
| ·材料处理 | 第41页 |
| ·材料取样 | 第41-42页 |
| ·提取总 RNA | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·内参设计 | 第43页 |
| ·DNA 消化与 cDNA 合成 | 第43-44页 |
| ·各组织 cDNA 模版与特异性引物验证 | 第44页 |
| ·实时定量 RT‐PCR | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-50页 |
| ·各组织 cDNA 模版与特异性引物的验证 | 第45-46页 |
| ·DhLHY 基因表达分析 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 农杆菌介导法转化拟南芥 | 第51-69页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·试验材料 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要试验仪器设备 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-60页 |
| ·提取总 RNA | 第51页 |
| ·cDNA 的合成 | 第51-52页 |
| ·ORF 特异性引物设计 | 第52-53页 |
| ·ORF 扩增 | 第53页 |
| ·PCR 产物回收 | 第53页 |
| ·目的片段回收产物与载体连接 | 第53-54页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选 | 第54页 |
| ·阳性克隆 PCR 菌检与测序 | 第54页 |
| ·提取质粒 | 第54-55页 |
| ·载体酶切 | 第55-57页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第57页 |
| ·酶切目的产物连接 | 第57-58页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选 | 第58页 |
| ·表达载体的第一轮酶切验证 | 第58页 |
| ·热击法农杆菌感受态的制备 | 第58-59页 |
| ·载体质粒转化农杆菌及阳性克隆的筛选 | 第59页 |
| ·提取农杆菌菌液质粒 | 第59页 |
| ·载体质粒转化大肠杆菌及阳性克隆筛选 | 第59-60页 |
| ·表达载体的第二轮酶切验证 | 第60页 |
| ·拟南芥种植与侵染 | 第60-62页 |
| ·拟南芥种植与处理 | 第60页 |
| ·转化介质的配制 | 第60页 |
| ·扩大培养农杆菌菌液 | 第60-61页 |
| ·浸花法侵染拟南芥 | 第61页 |
| ·转基因拟南芥纯合子植株的筛选 | 第61-62页 |
| ·转基因植株鉴定 | 第62-63页 |
| ·转基因植株提取 DNA | 第62页 |
| ·PCR 检测阳性植株 | 第62-63页 |
| ·转基因植株表型观察 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-68页 |
| ·ORF 区 PCR 扩增结果 | 第63页 |
| ·中间载体酶切结果 | 第63-64页 |
| ·表达载体酶切验证结果 | 第64-66页 |
| ·转基因植株 PCR 检测 | 第66-67页 |
| ·转基因植株表型分析 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| 第五章 结论与展望 | 第69-71页 |
| ·研究结论 | 第69页 |
| ·研究展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 附录 | 第79-81页 |
| 个人简介 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |