| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第一章 ：综述 | 第9-23页 |
| 一、引言 | 第9页 |
| 二、乙型肝炎病毒基因组结构 | 第9-12页 |
| 三、miRNA及其产生机制 | 第12-14页 |
| ·miRNA简介 | 第12页 |
| ·miRNA编码基因及其产生机制 | 第12-14页 |
| 四、miRNA的作用机制 | 第14-16页 |
| ·RISC及其成分 | 第14-15页 |
| ·miRNA抑制靶基因表达的作用方式 | 第15-16页 |
| 五、病毒自身表达miRNA的发现及功能 | 第16-18页 |
| ·病毒自身表达miRNA的发现 | 第16-17页 |
| ·病毒miRNA的功能 | 第17-18页 |
| 六、miRNA的表达特性 | 第18页 |
| 七、miRNA的功能及其与肿瘤发生发展的关系 | 第18-21页 |
| ·miRNA的功能涉及生物体通路的多个方面 | 第18-20页 |
| ·miRNA作为tumor suppressor或cancer inducer发挥作用 | 第20-21页 |
| 八、miRNA在HCC的发生发展中具有重要作用 | 第21-23页 |
| 第二章 ： HBV自身表达miRNA的验证及功能研究和HBV对肝癌细胞系miRNA表达谱的影响 | 第23-48页 |
| 一、引言 | 第23-25页 |
| ·HBV基因组具有表达自身miRNA的序列特征 | 第23-24页 |
| ·HBV可能影响肝癌细胞系人源miRNA表达谱 | 第24-25页 |
| ·研究思路 | 第25页 |
| 二、材料和方法 | 第25-34页 |
| ·主要实验材料 | 第25-29页 |
| ·细胞系 | 第25-26页 |
| ·各种功能载体 | 第26-28页 |
| ·主要试剂/试剂盒 | 第28-29页 |
| ·其他实验材料 | 第29页 |
| ·研究方法 | 第29-34页 |
| ·小RNA SOLiD高通量测序 | 第29页 |
| ·Northern Blotting验证hbv-miR-BCP的表达 | 第29-30页 |
| ·克隆测序鉴定hbv-miR-BCP的表达 | 第30页 |
| ·软件预测miRNA靶基因 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·细胞转染 | 第32-33页 |
| ·双荧光素酶报告系统信号检测与统计处理 | 第33页 |
| ·qRT-PCR验证人源miRNA表达谱 | 第33-34页 |
| ·半定量PCR和Westem Blotting检测HepG2中HBx的表达 | 第34页 |
| 三、 结果分析与讨论1——HBV自身表达miRNA的验证和功能研究 | 第34-41页 |
| ·结果与分析 | 第34-39页 |
| ·SOLiD测序发现一个由HBVBCP区表达的miRNA—hbv-miR-BCP | 第34-35页 |
| ·Northern Blotting证实hbv-miR-BCP的表达 | 第35页 |
| ·克隆测序验证hbv-miR-BCP的表达 | 第35-37页 |
| ·miRanda预测得到3个hbv-miR-BCP的候选靶基因 | 第37-38页 |
| ·成功优化三种质粒共同转染体系 | 第38页 |
| ·TRADD可能为hbv-miR-BCP的靶基因 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| ·克隆测序中上游引物的设计 | 第39-40页 |
| ·hbv-miR-BCP序列3’端游离不定 | 第40页 |
| ·靶基因预测范围设计 | 第40页 |
| ·hbv-miR-BCP靶基因与病毒在宿主体内感染与存活的关系 | 第40-41页 |
| 四、 结果分析与讨论2——HBV对肝癌细胞系人源miRNA表达谱的影响分析 | 第41-47页 |
| ·结果与分析 | 第41-46页 |
| ·SOLiD测序得到多种差异表达的人源miRNA | 第41-42页 |
| ·qRT-PCR验证了10种差异表达的人源miRNA | 第42页 |
| ·差异表达的人源miRNA对HCC发展起到一定作用 | 第42-43页 |
| ·成功构建HBV X基因表达载体 | 第43-44页 |
| ·RNA半定量显示HBx在HepG2中表达 | 第44-45页 |
| ·Westem blotting显示HBx在HepG2中存在表达 | 第45页 |
| ·高表达HBx的HepG2细胞中人源miRNA的表达存在差异 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·在HepG2和HepG2.2.15间差异表达的人源miRNA功能分析 | 第46-47页 |
| ·HBV X蛋白影响HepG2.2.15中人源miRNA表达谱的可能性分析 | 第47页 |
| 五、结论 | 第47-48页 |
| ·HBV能够表达自身miRNA—-hbv-miR-BCP,并初步鉴定TRADD可能为其的靶基因 | 第47页 |
| ·HBV的存在可影响肝癌细胞系中多种人源miRNA的表达 | 第47-48页 |
| 附表 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
