| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| ·果胶质 | 第9页 |
| ·细菌果胶酶主要产生菌 | 第9-10页 |
| ·细菌果胶酶及其分类 | 第10-14页 |
| ·细菌果胶酶的应用 | 第14-16页 |
| ·植物纤维的脱胶 | 第14页 |
| ·在纺织业方面的应用 | 第14-15页 |
| ·在咖啡和茶发酵中的应用 | 第15页 |
| ·在污水处理方面的应用 | 第15页 |
| ·在造纸方面的应用 | 第15-16页 |
| ·其他方面的应用 | 第16页 |
| ·细菌果胶酶分子生物学研究进展 | 第16-17页 |
| ·本课题的目的及研究意义 | 第17-18页 |
| ·实验方案 | 第18-19页 |
| 第二章 果胶酶基因片段的克隆及鉴定 | 第19-37页 |
| ·材料与试剂 | 第19-22页 |
| ·菌株和载体 | 第19页 |
| ·试剂盒与酶 | 第19页 |
| ·常用试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·主要培养基及试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-31页 |
| ·培养条件 | 第22页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶的制作 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| ·特异性引物的设计及PCR扩增 | 第24-26页 |
| ·引物的设计 | 第24页 |
| ·退火温度的初步优化 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| ·目的片段与pMD20-T载体的连接反应 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌JM109感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第28页 |
| ·转化 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·双酶切反应 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-37页 |
| 第三章 目的基因片段的测序及分析 | 第37-56页 |
| ·试验方法 | 第37页 |
| ·目的基因的测序 | 第37页 |
| ·序列分析 | 第37页 |
| ·序列分析及拟表达蛋白预测结果 | 第37-56页 |
| ·B-3菌中的目的片段pelB的测序及分析 | 第37-47页 |
| ·B-3中目的片段pelB的测序结果 | 第37-38页 |
| ·进化树构建 | 第38-40页 |
| ·pelB的蛋白性质与结构预测 | 第40-47页 |
| ·A-7菌中的目的片段测序及拟表达蛋白质结构测序 | 第47-56页 |
| ·A-7中获得的目的片段的测序结果 | 第47-48页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第48-56页 |
| 第四章 pe/B基因的表达载体构建 | 第56-70页 |
| ·材料 | 第56-58页 |
| ·菌株与质粒 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·主要实验仪器 | 第56页 |
| ·主要试剂配制 | 第56-58页 |
| ·方法 | 第58-63页 |
| ·引物合成 | 第58页 |
| ·PCR反应 | 第58-59页 |
| ·PCR产物的回收 | 第59页 |
| ·质粒pET32a的提取 | 第59页 |
| ·双酶切反应 | 第59-60页 |
| ·酶切产物回收 | 第60页 |
| ·BL21感受态细胞的制备 | 第60页 |
| ·连接反应 | 第60-61页 |
| ·转化 | 第61页 |
| ·鉴定 | 第61页 |
| ·目的蛋白片段的诱导表达 | 第61-62页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第62-63页 |
| ·结果 | 第63-70页 |
| ·空载质粒pET32a和表达载体构建流程 | 第63-66页 |
| ·PCR扩增 | 第66页 |
| ·质粒pET32a和PCR产物的酶切反应 | 第66-68页 |
| ·目的片段的诱导表达 | 第68-70页 |
| 第五章 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76页 |