| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-15页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 1 雌激素信号通路、周期节律及SUMO化修饰研究概况 | 第17-35页 |
| ·雌激素信号通路概述 | 第17-19页 |
| ·核受体超家族 | 第17页 |
| ·雌激素受体ER(estrogen receptor)的结构 | 第17-18页 |
| ·雌激素信号通路 | 第18-19页 |
| ·雌激素受体与乳腺癌 | 第19页 |
| ·周期节律及其与肿瘤关系简介 | 第19-27页 |
| ·周期性反馈调控 | 第19-22页 |
| ·CLOCK的基本结构 | 第22-23页 |
| ·时钟蛋白的翻译后修饰 | 第23-24页 |
| ·周期节律与细胞分裂 | 第24页 |
| ·周期节律与人类癌症 | 第24-27页 |
| ·SUMO化概况 | 第27-33页 |
| ·SUMO简介 | 第27页 |
| ·SUMO修饰过程 | 第27-28页 |
| ·SUMO化修饰功能 | 第28-32页 |
| ·SUMO修饰与疾病 | 第32-33页 |
| ·论文选题依据及研究内容 | 第33-35页 |
| ·选题依据 | 第33页 |
| ·研究内容 | 第33-35页 |
| 2 CLOCK与雌激素受体ERα间相互作用的确定 | 第35-48页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·仪器与试剂 | 第35-36页 |
| ·仪器 | 第35-36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-41页 |
| ·细胞培养 | 第36-37页 |
| ·细胞转染 | 第37页 |
| ·免疫共沉淀 | 第37页 |
| ·Western blotting | 第37-38页 |
| ·考马斯亮蓝法测蛋白浓度 | 第38-39页 |
| ·免疫荧光 | 第39页 |
| ·荧光素酶报告基因实验 | 第39-40页 |
| ·siCLOCK质粒构建 | 第40-41页 |
| ·统计学分析方法 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-46页 |
| ·在MCF-7细胞中CLOCK和ERα间存在相互作用 | 第41-42页 |
| ·CLOCK和ERα能在COS.7细胞中发生相互作用 | 第42-43页 |
| ·CLOCK和ERα在MCF-7细胞中的分布 | 第43页 |
| ·CLOCK激活ERα介导的ERE报告基因活性 | 第43-45页 |
| ·CLOCK对ERα的转录激活具有剂量依赖性 | 第45页 |
| ·CLOCK被干扰后抑制ERα的转录激活能力 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 3 CLOCK的SUMO化修饰研究 | 第48-73页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·材料与试剂 | 第48-49页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-56页 |
| ·细胞培养 | 第49页 |
| ·免疫共沉淀 | 第49页 |
| ·Western blotting | 第49页 |
| ·考马斯亮蓝法测蛋白浓度 | 第49页 |
| ·质粒构建 | 第49-55页 |
| ·以高纯度质粒小提中量试剂盒进行质粒提取 | 第55页 |
| ·荧光素酶报告基因实验 | 第55-56页 |
| ·免疫荧光 | 第56页 |
| ·核质分离 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-70页 |
| ·CLOCK SUMO化的确定 | 第56-57页 |
| ·CLOCK SUMO化位点的确定 | 第57-59页 |
| ·CLOCK的SUMO化位点突变体降低了其转录活性 | 第59-60页 |
| ·SENP1作为CLOCK的去SUMO化酶抑制CLOCK的转录活性 | 第60-63页 |
| ·CLOCK的SUMO化对其下游基因表达的影响 | 第63-65页 |
| ·SUMO化影响了CLOCK在细胞中的定位 | 第65-66页 |
| ·SENP1降低了CLOCK与BMAL1间的相互作用 | 第66-67页 |
| ·CLOCK的SUMO化位点突变体降低了其与BMAL1间的相互作用#53 | 第67-68页 |
| ·CLOCK的SUMO化位点突变降低了其与BMAL1在细胞核中的相互作用 | 第68页 |
| ·SUMO修饰通过抑制CLOCK的泛素化增强了CLOCK蛋白稳定性 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-73页 |
| 4 CLOCK的SUMO化影响了其与ERα间的相互作用 | 第73-77页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·仪器与试剂 | 第73页 |
| ·仪器 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-74页 |
| ·细胞培养 | 第73页 |
| ·免疫共沉淀 | 第73-74页 |
| ·Western blotting | 第74页 |
| ·考马斯亮蓝法测蛋白浓度 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-75页 |
| ·CLOCK SUMO化位点突变体降低了其与ERα间的相互作用 | 第74-75页 |
| ·SENP1降低了CLOCK与ERα间的相互作用 | 第75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 5 CLOCK的SUMO化增强了其对ERα的辅激活能力 | 第77-81页 |
| ·引言 | 第77页 |
| ·仪器与试剂 | 第77页 |
| ·仪器 | 第77页 |
| ·试剂 | 第77页 |
| ·实验方法 | 第77-78页 |
| ·细胞培养 | 第77页 |
| ·细胞转染 | 第77页 |
| ·荧光素酶报告基因实验 | 第77-78页 |
| ·实验结果与分析 | 第78-80页 |
| ·CLOCK的SUMO位点突变体降低了其对ERα的辅激活能力 | 第78-79页 |
| ·BMAL1与CLOCK协同调控ERα的转录活性 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 6 SUMO化CLOCK促进MCF-7细胞的增殖 | 第81-89页 |
| ·引言 | 第81页 |
| ·仪器与试剂 | 第81-82页 |
| ·仪器 | 第81页 |
| ·试剂 | 第81-82页 |
| ·实验方法 | 第82-84页 |
| ·细胞培养 | 第82页 |
| ·细胞转染 | 第82页 |
| ·荧光素酶报告基因实验 | 第82页 |
| ·总RNA提取 | 第82-83页 |
| ·RNA浓度测定 | 第83页 |
| ·反转录合成cDNA | 第83-84页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第84页 |
| ·MTT检测细胞增殖 | 第84页 |
| ·流式细胞术 | 第84页 |
| ·实验结果与分析 | 第84-87页 |
| ·SUMO化CLOCK增强了Cyclin D1的转录水平 | 第84-85页 |
| ·SUMO化CLOCK增强Cyclin D1-Luc报告基因活性 | 第85-86页 |
| ·CLOCK促进MCF-7细胞的增殖 | 第86-87页 |
| ·CLOCK的过表达促进了细胞周期进程 | 第87页 |
| ·实验讨论 | 第87-88页 |
| ·小结 | 第88-89页 |
| 结论与展望 | 第89-91页 |
| 结论 | 第89-90页 |
| 展望 | 第90-91页 |
| 创新点摘要 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 附录 | 第100-103页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105-106页 |
