| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-19页 |
| ·肺结核分枝杆菌的危害 | 第10页 |
| ·复苏促进因子(Rpf) | 第10-13页 |
| ·Rpf蛋白的发现 | 第10-11页 |
| ·复苏因子的结构 | 第11页 |
| ·结核分枝杆菌Rpf基因结构分析 | 第11-12页 |
| ·肺结核复苏因子的应用 | 第12-13页 |
| ·Rpf在细胞内的作用 | 第13页 |
| ·复苏促进因子结合蛋白(Rip) | 第13-17页 |
| ·肺结核分枝杆菌细胞壁特点 | 第14页 |
| ·复苏因子结合蛋白的特点 | 第14-15页 |
| ·细胞壁片段的酶学活性和切割位点的鉴定 | 第15-16页 |
| ·RipAc和RipB的结构 | 第16-17页 |
| ·NlpC/p60家族的同源性 | 第17页 |
| ·本课题研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 第2章 RpfE的构建与表达 | 第19-32页 |
| ·前言 | 第19页 |
| ·材料与仪器 | 第19-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·实验仪器 | 第19-20页 |
| ·部分溶液的配置 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-24页 |
| ·设计引物 | 第21页 |
| ·PCR扩增体系及条件 | 第21-22页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第22页 |
| ·质粒的转化 | 第22页 |
| ·质粒的抽提 | 第22-23页 |
| ·表达菌株的构建 | 第23页 |
| ·重组质粒的表达 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-28页 |
| ·目的基因rpfE的扩增 | 第24-26页 |
| ·RpfE表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·pGEX-4T-I-RpfE质粒在大肠杆菌的表达 | 第27-28页 |
| ·优化rpfE蛋白在大肠杆菌的表达 | 第28-30页 |
| ·pGEX-4T-rpfE的纯化 | 第30页 |
| ·本章小结 | 第30-32页 |
| 第3章 复苏因子结合蛋白(RipB)的克隆,表达和纯化 | 第32-41页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-33页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-33页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·其它方法 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-39页 |
| ·ripB编码基因的扩增 | 第33-35页 |
| ·ripB的表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·ripB基因在大肠杆菌中的表达 | 第36-37页 |
| ·RipB在大肠杆菌中的表达优化 | 第37-38页 |
| ·RipB蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·本章讨论 | 第39页 |
| ·本章结论 | 第39-41页 |
| 第4章 复苏促进因子(RpfE)和复苏促进因子结合蛋白(RipB)的效果 | 第41-51页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·实验材料与方法 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·仪器 | 第41页 |
| ·溶液的配制 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·藤黄微球菌的复苏和活化 | 第41-42页 |
| ·透析袋的处理 | 第42页 |
| ·蛋白质的透析和浓缩 | 第42页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第42-43页 |
| ·目标蛋白对藤黄微球菌复苏作用的效果 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-49页 |
| ·标准曲线建立以及蛋白质浓度测定 | 第44页 |
| ·目标蛋白对藤黄微球菌的复苏作用 | 第44-47页 |
| ·目标蛋白对藤黄微球菌的促生长作用 | 第47-49页 |
| ·本章总结 | 第49-51页 |
| 第5章 总结与展望 | 第51-53页 |
| ·全文总结 | 第51-52页 |
| ·展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
