| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| ·概述 | 第9-10页 |
| ·-酮戊二酸的性质与应用 | 第9页 |
| ·-酮戊二酸的生物合成 | 第9-10页 |
| ·解脂亚洛酵母生产 -酮戊二酸的研究进展 | 第10-13页 |
| ·解脂亚洛酵母的优势 | 第10页 |
| ·解脂亚洛酵母积累 -酮戊二酸的机理 | 第10-12页 |
| ·解脂亚洛酵母生产 -酮戊二酸的国内外研究现状 | 第12-13页 |
| ·代谢工程改造解脂亚洛酵母生产有机酸的研究进展 | 第13-16页 |
| ·解脂亚洛酵母表达系统的基因操作 | 第13-15页 |
| ·代谢工程改造解脂亚洛酵母生产有机酸的国内外研究现状 | 第15-16页 |
| ·立题依据 | 第16-17页 |
| ·调控胞内乙酰辅酶 A 代谢促进 -酮戊二酸的积累 | 第16页 |
| ·强化丙酮酸羧化途径促进 -酮戊二酸的积累 | 第16-17页 |
| ·本课题的研究意义 | 第17页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-25页 |
| ·菌种和培养基 | 第19页 |
| ·菌种和质粒 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·试剂、酶、引物、Marker 及相关试剂盒 | 第19页 |
| ·培养方法 | 第19-20页 |
| ·基因操作方法 | 第20-22页 |
| ·DNA 操作方法 | 第20页 |
| ·p0 质粒上标记基因的替换 | 第20页 |
| ·表达载体的构建 | 第20-22页 |
| ·Y. lipolytica 基因工程菌的构建及验证 | 第22页 |
| ·重组质粒稳定性验证 | 第22页 |
| ·分析方法 | 第22-25页 |
| ·细胞内乙酰辅酶 A 含量的测定 | 第22页 |
| ·细胞内粗酶液的提取和酶活的测定 | 第22-23页 |
| ·RNA 的提取和实时定量 PCR | 第23页 |
| ·甘油和有机酸的测定 | 第23-24页 |
| ·其他参数的测定 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-47页 |
| ·调控乙酰辅酶 A 代谢促进 -酮戊二酸的生成 | 第25-32页 |
| ·质粒 p0 上标记基因的替换 | 第25-27页 |
| ·ACS1 和 ACL 基因的扩增与表达质粒的构建 | 第27页 |
| ·过量表达 ACS1 和 ACL 重组菌的构建及 PCR 验证 | 第27-28页 |
| ·过量表达 ACS1 和 ACL 对胞内酶活和乙酰辅酶 A 浓度的影响 | 第28-30页 |
| ·过量表达 ACS1 和 ACL 对解脂亚洛酵母产 -酮戊二酸的影响 | 第30-32页 |
| ·小结 | 第32页 |
| ·强化丙酮酸回补途径促进 -酮戊二酸的积累 | 第32-39页 |
| ·目的基因的扩增与表达质粒的构建 | 第33页 |
| ·过量表达 ScPYC1 和 RoPYC2 重组菌的构建及 PCR 验证 | 第33-34页 |
| ·过量表达 ScPYC1 和 RoPYC2 对胞内丙酮酸羧化酶酶活的影响 | 第34-35页 |
| ·过量表达 ScPYC1 和 RoPYC2 对解脂亚洛酵母产 -酮戊二酸的影响 | 第35-37页 |
| ·过量表达 ScPYC1 和 RoPYC2 对胞内碳代谢流的影响 | 第37-39页 |
| ·小结 | 第39页 |
| ·重组菌的发酵优化 | 第39-44页 |
| ·乙酸钠对 Y. lipolytica-ACS1 产 -酮戊二酸的影响 | 第40页 |
| ·柠檬酸三钠对 Y. lipolytica-ACL 产 -酮戊二酸的影响 | 第40-41页 |
| ·生物素对 Y. lipolytica-ScPYC1 和 Y. lipolytica-RoPYC2 产酸的影响 | 第41-42页 |
| ·重组菌在 3-L 发酵罐上的发酵性能比较 | 第42-44页 |
| ·小结 | 第44页 |
| ·本章总结 | 第44-47页 |
| 主要结论与展望 | 第47-49页 |
| 主要结论 | 第47页 |
| 展望 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |
