| 中英文缩对照 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-21页 |
| 1 RNAi技术 | 第13-14页 |
| 2 干扰载体构建技术 | 第14-15页 |
| 3 农杆菌介导的遗传转化技术 | 第15-16页 |
| 4 分析启动子的方法 | 第16-17页 |
| 5 蜡质相关转录因子的研究进展 | 第17-18页 |
| 6 水稻OsWTF1和OsWTF2基因的研究基础 | 第18-19页 |
| 7 本研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 水稻蜡质相关转录因子基因OsWTF1和Os WTF2的干扰表达载体的构建 | 第21-34页 |
| 1 材料 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·质粒与菌株 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| 2 试验方法 | 第21-30页 |
| ·干扰表达载体构建技术路线 | 第21-23页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·大肠杆菌、农杆菌感受态制备及质粒转化 | 第23页 |
| ·CTAB法提取植物DNA | 第23-24页 |
| ·PCR扩增3DLink片段 | 第24页 |
| ·PCR产物与T载体连接并筛选阳性重组子 | 第24-25页 |
| ·阳性重组T载体、中间载体的双酶切及纯化回收 | 第25页 |
| ·中间载体与目的DNA片段连接反应 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pBSK-3DLink双酶切鉴定 | 第26页 |
| ·PCR扩增OsWTF1和OsWTF2基因的顺式片段 | 第26-27页 |
| ·PCR产物OsWTF顺式片段与T载体连接并筛选阳性重组子 | 第27页 |
| ·阳性重组T载体、pBSK-3DLink的双酶切及纯化回收 | 第27页 |
| ·pBSK-3DLink与OsWTF顺式片段连接反应 | 第27页 |
| ·重组质粒pBSK-WTFS的PCR鉴定和双酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增OsWTF1和OsWTF2基因的反式片段 | 第28页 |
| ·PCR产物OsWTF反式片段与T载体连接并筛选阳性重组子 | 第28页 |
| ·阳性重组T载体、pBSK-WTFS的双酶切及纯化回收 | 第28页 |
| ·pBSK-WTFS与OsWTF反式片段连接反应 | 第28页 |
| ·重组质粒pBSK-WTFI的PCR鉴定和双酶切鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒pBSK-WTFI、载体P1301m的双酶切及纯化回收 | 第28-29页 |
| ·双酶切载体P1301m与整个RNA干扰片段连接反应 | 第29-30页 |
| ·干扰表达载体P1301m-WTFI的双酶切鉴定 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-32页 |
| ·PCR扩增OsWTF1和OsWTF2基因干扰载体的顺式和反式片段 | 第30页 |
| ·双酶切检测重组载体pBSK-WTF1S和pBSK-WTF2S的顺式片段 | 第30-31页 |
| ·干扰表达载体p1301m-WTFI和p1301m-WTF2的PCR和酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 OsWTF1和OsWTF2基因的RNA干扰的水稻遗传转化 | 第34-43页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| ·表达载体和植物材料 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| 2 试验方法 | 第35-36页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导 | 第35页 |
| ·根癌农杆菌与水稻愈伤组织的共培养 | 第35页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选和植株再生 | 第35-36页 |
| 3 转基因阳性植株RT-PCR检测 | 第36-38页 |
| ·使用引物设计软件Primer5设计检测引物 | 第36页 |
| ·使用Trizol试剂抽提方法提取水稻总RNA | 第36-37页 |
| ·除去水稻RNA中的DNA | 第37页 |
| ·水稻总RNA反转录合成第一链 | 第37页 |
| ·PCR扩增ACTIN基因,调节cDNA的浓度 | 第37-38页 |
| ·OsWTF1和OsWTF2基因的表达检测 | 第38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-41页 |
| ·诱导愈伤组织 | 第38-39页 |
| ·共培养 | 第39页 |
| ·分化培养 | 第39-40页 |
| ·生根培养 | 第40-41页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测结果 | 第41页 |
| 5 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 OsWTF1和OsWTF2基因5’端缺失片段启动子的克隆以及表达载体的构建 | 第43-50页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| ·质粒与菌种 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-47页 |
| ·启动子表达载体构建技术路线 | 第43页 |
| ·引物设计 | 第43-45页 |
| ·PCR产物与T载体连接并筛选阳性重组子 | 第45页 |
| ·阳性重组T载体、表达载体的双酶切及纯化回收 | 第45-46页 |
| ·表达载体与目的DNA片断连接反应 | 第46页 |
| ·大肠杆菌感受态制备及质粒转化 | 第46页 |
| ·重组质粒pOsWTF启动子缺失体的PCR和双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-48页 |
| ·PCR扩增OsWTF1和OsWTF2基因的缺失启动子片段 | 第47页 |
| ·鉴定双酶切重组T载体获得缺失启动子片段 | 第47-48页 |
| ·重组子的PCR和酶切鉴定 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56页 |
