| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-19页 |
| 1. 乙烯是植物体内具有重要调节作用的内源激素之一 | 第10-12页 |
| ·乙烯的生物合成 | 第10-11页 |
| ·乙烯的信号传导途径 | 第11-12页 |
| 2.水稻乙烯受体是乙烯信号转导途径中直接感知乙烯信号的重要元件 | 第12-15页 |
| ·水稻乙烯受体的结构与功能 | 第12-14页 |
| ·水稻乙烯受体与其它高等植物乙烯受体的序列比对 | 第14页 |
| ·水稻乙烯的表达 | 第14-15页 |
| 3. TPR结构域是一种介导蛋白质之间相互作用的重要基序 | 第15-18页 |
| ·TPR类蛋白的结构与生理功能 | 第15页 |
| ·OsTPR1与其它TPR蛋白的结构比对 | 第15-17页 |
| ·植物TPR1与乙烯受体相互作用的研究情况 | 第17-18页 |
| 4. 本课题的研究背景、目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 酵母双杂交验证乙烯受体与OsTPR1的互作情况 | 第19-38页 |
| 1. 实验材料 | 第19-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·酶及其它生化试剂 | 第19页 |
| ·常用实验仪器 | 第19页 |
| ·培养基及配方 | 第19-20页 |
| 2. 试验方法 | 第20-29页 |
| ·引物设计 | 第20-21页 |
| ·T-OsERS1、OsERS2、OsETR2、OsTPR1中间载体的构建 | 第21-25页 |
| ·T-OsERS1、OsERS2、OsETR2、OsTPR1中间载体构建技术路线 | 第21-22页 |
| ·PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增片段与pMD18-T载体的重组 | 第23页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·大肠杆菌细胞的热激转化法 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第24-25页 |
| ·pGADT7-OsERS1、OsERS2、OsETR2和pGBKT7-OsTPR1酵母表达载体的构建 | 第25-28页 |
| ·pGADT7-OsERS1、OsERS2、OsETR2和pGBKT7-OsTPR1酵母表达载体构建技术路线 | 第25-27页 |
| ·双酶切反应 | 第27页 |
| ·目的片段与酵母表达载体重组 | 第27页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态 | 第27-28页 |
| ·转化子的检测与鉴定 | 第28页 |
| ·pGADT7-OsERS1、OsERS2、OsETR2分别与pGBKT7-OsTPR1重组质粒共转化酵母菌 | 第28-29页 |
| ·AH109电击感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·电击共转化 | 第29页 |
| ·共转酵母转化子的检测 | 第29页 |
| ·蛋白互作的检测 | 第29页 |
| 3. 结果与分析 | 第29-34页 |
| ·OsERS1、OsERS2、OsETR2、OsTPR1基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·T-OsERS1、OsERS2、OsETR2、OsTPR1中间载体的构建 | 第30-31页 |
| ·TA克隆产物的菌液PCR鉴定 | 第30页 |
| ·序列比对结果 | 第30-31页 |
| ·pGADT7-OsERS1、OsERS2、OsETR2和pGBKT7-OsTPR1酵母表达载体的构建 | 第31页 |
| ·pGADT7-OsERS1、OsERS2、OsETR2分别与pGBKT7-OsTPR1重组质粒共转化酵母菌 | 第31-32页 |
| ·两蛋白互作的检测 | 第32-34页 |
| 4. 讨论 | 第34-38页 |
| ·酵母双杂交表达载体的构建 | 第35页 |
| ·其它两个乙烯受体的表达载体构建不成功的原因 | 第35-36页 |
| ·酵母感受态的制备及共转化 | 第36页 |
| ·酵母双杂交检测乙烯受体与OsTPR1蛋白的互作 | 第36-38页 |
| 第三章 酵母双杂交确定OsERS1可以与OsTPR1互作的关键区域 | 第38-47页 |
| 1. 实验材料 | 第38页 |
| ·菌株与质粒 | 第38页 |
| ·酶及其它生化试剂 | 第38页 |
| ·常用实验仪器 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| 2.试验方法 | 第38-42页 |
| ·引物设计 | 第38-39页 |
| ·含OsERS1不同结构域基因片段的酵母表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·酵母表达载体构建技术路线 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增 | 第40页 |
| ·PCR扩增片段与pGADT-7载体的重组 | 第40-41页 |
| ·pGADT7-OsERS1-1、2、3、4分别与pGBKT7-OsTPR1质粒共转化酵母 | 第41-42页 |
| ·蛋白互作检测来确定OsERS1可以与OsTPR1互作的关键区域 | 第42页 |
| 3. 结果与分析 | 第42-45页 |
| ·含OsERS1不同结构域基因片段OsERS1-1、OsERS1-2、OsERS1-3 #33和OsERS1-4的PCR扩增 | 第42页 |
| ·含OsERS1不同结构域基因片段的酵母表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·pGADT7-OsERS1-1、2、3、4分别与pGBKT7-OsTPR1质粒共转化酵母 | 第43-44页 |
| ·蛋白互作检测来确定OsERS1可以与OsTPR1互作的关键区域 | 第44-45页 |
| 4. 讨论 | 第45-47页 |
| ·酵母双杂交表达载体的构建 | 第45页 |
| ·酵母双杂交确定OsERS1可以与OsTPR1互作的关键区域 | 第45-47页 |
| 第四章 OsERS1与OsTPR1双分子荧光互补载体的构建及原生质体的制备 | 第47-55页 |
| 1. 实验材料 | 第47-48页 |
| ·植物材料 | 第47页 |
| ·菌株与质粒 | 第47页 |
| ·酶及其它生化试剂 | 第47页 |
| ·常用实验仪器 | 第47-48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| 2.试验方法 | 第48-51页 |
| ·引物设计 | 第48页 |
| ·双分子荧光互补(BiFC)载体的构建 | 第48-50页 |
| ·双分子荧光互补载体构建技术路线 | 第48-50页 |
| ·PCR扩增 | 第50页 |
| ·PCR扩增片段与双分子荧光互补载体的重组 | 第50页 |
| ·水稻原生质体的制备 | 第50-51页 |
| 3.结果与分析 | 第51-53页 |
| ·pUC-SPYNE-OsERS1及pUC-SPYCE-OsTPR1双分子荧光互补载体的构建 | 第51-52页 |
| ·水稻原生质体的制备 | 第52-53页 |
| 4. 讨论 | 第53-55页 |
| ·双分子荧光互补载体的构建 | 第53-54页 |
| ·水稻原生质体的制备 | 第54-55页 |
| 第五章 总结及下一步工作计划 | 第55-56页 |
| 1.结论 | 第55页 |
| 2.创新点 | 第55页 |
| 3.进一步工作计划 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
| 缩略词 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
