| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一部分 前言 | 第9-14页 |
| 1 钾素及我国钾营养现状 | 第9-10页 |
| ·钾素生理功能 | 第9-10页 |
| ·我国土壤和作物钾营养的现状 | 第10页 |
| 2 植物K~+转运体相关蛋白研究 | 第10-12页 |
| ·植物对钾的吸收与转运 | 第10-11页 |
| ·植物钾吸收与转运相关蛋白 | 第11-12页 |
| ·野生高钾植物商陆 | 第12页 |
| 3 本研究目的与意义 | 第12-14页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第14-33页 |
| 1 材料与试剂 | 第14-15页 |
| ·植物材料 | 第14页 |
| ·菌株和载体 | 第14页 |
| ·缓冲液 | 第14-15页 |
| ·酶和试剂 | 第15页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第15页 |
| 2. 试验方法 | 第15-33页 |
| ·植物材料的培养 | 第15-16页 |
| ·植物种子预处理及催芽 | 第15页 |
| ·植物幼苗培养 | 第15-16页 |
| ·商陆吸钾动力学测定 | 第16-17页 |
| ·样品的收集 | 第16-17页 |
| ·钾含量的测定与分析 | 第17页 |
| ·PaHAK1基因的克隆 | 第17-23页 |
| ·引物的设计与PCR | 第17-18页 |
| ·商陆组织RNA的提取 | 第18-19页 |
| ·DNaseⅠ酶处理 | 第19页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第19页 |
| ·3′非编码区的扩增 | 第19页 |
| ·PaHAK1的扩增 | 第19-20页 |
| ·PCR产物的T-A克隆 | 第20-21页 |
| ·目的基因的鉴定 | 第21-23页 |
| ·PaHAKl基因表达分析 | 第23页 |
| ·引物的设计 | 第23页 |
| ·内参的确定 | 第23页 |
| ·Real-Time PCR | 第23页 |
| ·分析方法 | 第23-24页 |
| ·PaHAK1过表达载体的构建 | 第24页 |
| ·EHA105感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·过表达载体的构建 | 第24页 |
| ·农杆菌介导的水稻快速转化 | 第24-26页 |
| ·农杆菌的转化 | 第25页 |
| ·种子的处理,接种及愈伤组织的诱导 | 第25页 |
| ·浸染液的制备 | 第25页 |
| ·愈伤组织的浸染和共培养 | 第25页 |
| ·抗性愈伤的筛选 | 第25-26页 |
| ·分化 | 第26页 |
| ·生根培养 | 第26页 |
| ·炼苗及成苗后的移栽 | 第26页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第26-28页 |
| ·水稻叶片总DNA的提取 | 第26页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第26-28页 |
| ·酵母真核表达载体的构建 | 第28-32页 |
| ·引物设计和PCR | 第28-29页 |
| ·PCR反应体系 | 第29页 |
| ·PaHAK1的T-A克隆 | 第29-30页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·酵母的转化与鉴定 | 第32-33页 |
| ·酵母的转化 | 第32页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第33-42页 |
| 1 商陆K~+吸收动力学分析 | 第33-34页 |
| ·不同植物K~+吸收动力学比较 | 第33页 |
| ·不同供钾水平商陆根茎叶钾含量对比 | 第33-34页 |
| 2 商陆PaHAK1基因cDNA全长的克隆 | 第34-35页 |
| ·商陆不同组织总RNA的提取 | 第34页 |
| ·商陆3′非编码区cDNA的获得 | 第34-35页 |
| ·商陆PaHAK1基因cDNA全长的PCR扩增、克隆及鉴定 | 第35页 |
| 3 商陆PaHAK1的生物信息学分析 | 第35-37页 |
| 4 商陆PaHAK1在不同组织中的表达分析 | 第37页 |
| 5 PaHAK1过表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·过表达载体的构建 | 第38页 |
| ·检测与鉴定 | 第38页 |
| 6 水稻的快速转化 | 第38-40页 |
| ·农杆菌的转化 | 第38-39页 |
| ·水稻的接种与浸染 | 第39页 |
| ·抗性愈伤的筛选 | 第39-40页 |
| ·抗性愈伤的分化 | 第40页 |
| ·生根培养与炼苗 | 第40页 |
| 7 转基因水稻的检测 | 第40页 |
| 8 真核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·商陆PaHAK1的T-A克隆 | 第40页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 9 酵母的转化 | 第41-42页 |
| 第四部分 讨论 | 第42-45页 |
| 1 商陆是一种钾高效吸收植物 | 第42页 |
| 2 PaHAK1在钾高亲和吸收方面发挥重要作用 | 第42-43页 |
| 3 在水稻中超表达PaHAK1基因 | 第43页 |
| 4 酵母突变体功能互补 | 第43-45页 |
| 全文总结及本研究的创新点 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录: 缩略词 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52页 |