| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| ·非洲猪瘟的病原学 | 第12-17页 |
| ·非洲猪瘟病毒的形态与结构 | 第12-13页 |
| ·非洲猪瘟病毒的理化特性 | 第13页 |
| ·非洲猪瘟病毒的复制 | 第13-14页 |
| ·非洲猪瘟病毒编码的主要蛋白及功能 | 第14-17页 |
| ·非洲猪瘟的流行病学 | 第17-20页 |
| ·非洲猪瘟的流行历史与地理分布 | 第17-18页 |
| ·非洲猪瘟的易感动物 | 第18页 |
| ·非洲猪瘟的传播 | 第18-19页 |
| ·非洲猪瘟的分子流行病学 | 第19-20页 |
| ·非洲猪瘟的临床表现 | 第20-21页 |
| ·非洲猪瘟的检测诊断 | 第21-22页 |
| ·病原学检测 | 第21-22页 |
| ·血清学检测 | 第22页 |
| ·非洲猪瘟的防治 | 第22页 |
| ·研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 非洲猪瘟病毒P72蛋白单克隆抗体的制备 | 第23-43页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·所用的寡核苷酸引物 | 第23页 |
| ·质粒、菌株、细胞及动物 | 第23页 |
| ·主要药品及试剂 | 第23-24页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第24页 |
| ·主要缓冲液(溶液)及其配制 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-33页 |
| ·引物设计 | 第25-26页 |
| ·模板的制备 | 第26页 |
| ·PCR扩增P72基因 | 第26页 |
| ·DNA片段的纯化回收 | 第26页 |
| ·重组质粒pKG-P72的构建与鉴定 | 第26-28页 |
| ·P72基因诱导表达条件的确定 | 第28页 |
| ·诱导表达产物的SDS-PADE分析 | 第28页 |
| ·P72蛋白的可溶性分析 | 第28-29页 |
| ·P72蛋白的纯化 | 第29页 |
| ·P72蛋白的鉴定 | 第29页 |
| ·免疫原与检测抗原的制备 | 第29页 |
| ·动物免疫 | 第29-30页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第30页 |
| ·间接ELISA方法检测免疫小鼠的血清效价 | 第30页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第31页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第31页 |
| ·细胞融合 | 第31页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第31页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第31-32页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第32页 |
| ·单克隆抗体的效价测定 | 第32页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第32页 |
| ·单克隆抗体的间接免疫荧光检测 | 第32页 |
| ·单克隆抗体的Western blot分析 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-40页 |
| ·P72的PCR扩增 | 第33页 |
| ·重组质粒pKG-P72的鉴定 | 第33-34页 |
| ·P72基因诱导表达条件的确定 | 第34-35页 |
| ·P72蛋白的可溶性分析 | 第35-36页 |
| ·P72蛋白的纯化与鉴定 | 第36-37页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第37页 |
| ·免疫小鼠血清效价测定 | 第37-38页 |
| ·杂交瘤细胞株的筛选与建立 | 第38页 |
| ·单克隆抗体的效价测定 | 第38页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第38-39页 |
| ·单克隆抗体的间接免疫荧光检测 | 第39页 |
| ·单克隆抗体的Western blot分析 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·P72基因的原核表达 | 第40-41页 |
| ·动物免疫 | 第41页 |
| ·单克隆抗体的筛选 | 第41页 |
| ·单克隆抗体特性分析 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第三章 非洲猪瘟病毒P72基因重组杆状病毒的构建 | 第43-59页 |
| ·实验材料 | 第43-45页 |
| ·质粒、细胞、菌株/毒株及动物 | 第43-44页 |
| ·主要药品及试剂 | 第44页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第44页 |
| ·主要缓冲液及其配制 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-50页 |
| ·重组杆状病毒构建的操作流程 | 第45-46页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·PCR扩增P72基因 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pcDNA-P72的构建与鉴定 | 第47页 |
| ·重组转移质粒pFast-G-P72的构建与鉴定 | 第47页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid-G-P72)的构建 | 第47-48页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid-G-P72)的提取与鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组杆状病毒(BV-G-P72)的获得 | 第49页 |
| ·重组杆状病毒BV-G-P72的纯化与毒价测定 | 第49-50页 |
| ·重组杆状病毒BV-G-P72转导真核细胞 | 第50页 |
| ·间接免疫荧光试验检测P72蛋白的表达 | 第50页 |
| ·Western blot检测P72蛋白的表达 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-56页 |
| ·目的基因P72的PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·重组质粒pcDNA-P72的鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组转移质粒pFast-G-P72的鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid-G-P72)的鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组杆状病毒BV-G-P72的获得 | 第54页 |
| ·重组杆状病毒BV-G-P72的纯化与毒价的测定 | 第54-55页 |
| ·间接免疫荧光检测重组杆状病毒P72蛋白的表达 | 第55-56页 |
| ·Western blot检测重组杆状病毒P72蛋白的表达 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第56-57页 |
| ·P72基因重组杆状病毒的构建 | 第57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67页 |