| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语 | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-23页 |
| ·禽流感研究进展 | 第13-16页 |
| ·禽流感病毒简介 | 第13-14页 |
| ·血凝素蛋白HA与AIV致病性的关系 | 第14页 |
| ·禽流感的流行与危害 | 第14-15页 |
| ·禽流感的诊断 | 第15-16页 |
| ·禽流感主要防治措施 | 第16页 |
| ·H5N1型禽流感疫苗概况 | 第16-17页 |
| ·霍乱毒素B亚单位研究进展 | 第17-18页 |
| ·S-层蛋白研究进展 | 第18-23页 |
| ·S-层蛋白的分布、成分与结构 | 第18-19页 |
| ·S-层蛋白在细胞外膜上的固定 | 第19-20页 |
| ·S-层蛋白功能及在疫苗研制中的应用 | 第20页 |
| ·苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统 | 第20-23页 |
| 2 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-36页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·质粒和菌株 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·实验动物 | 第24-26页 |
| ·试剂配制 | 第26-28页 |
| ·抗生素 | 第26页 |
| ·细菌培养基 | 第26页 |
| ·感受态制备相关试剂 | 第26-27页 |
| ·质粒抽提的相关试剂 | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关试剂 | 第27页 |
| ·ELISA溶液 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-36页 |
| ·目的基因ha1和ctb的扩增、点突变和融合 | 第28-30页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·ha1、ctb基因扩增 | 第29-30页 |
| ·重叠PCR扩增目的基因ctb-ha1、ctb-linker-ha1 | 第30页 |
| ·重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pCTC-CTB、pCTC-HA1、pCTC-CH和pCTC-CLH的构建 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pCSCTB、pCSHAl、pCSCH和pCSCLH的构建 | 第31页 |
| ·重组质粒的转化与鉴定 | 第31-34页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备与质粒的转化 | 第31-33页 |
| ·苏云金芽胞杆菌BMB171感受态制备与电脉冲转化 | 第33-34页 |
| ·质粒的小量提取与鉴定 | 第34页 |
| ·重组菌株MICH、MICLH质粒稳定性检测 | 第34页 |
| ·重组菌株的血凝和血凝抑制实验 | 第34-35页 |
| ·试验菌液的制备 | 第34页 |
| ·凝试验(HA)方法 | 第34-35页 |
| ·凝抑制试验(HI)方法 | 第35页 |
| ·重组菌株免疫商品代雏鸡试验 | 第35-36页 |
| ·免疫抗原的制备 | 第35页 |
| ·动物实验 | 第35页 |
| ·样品的采集 | 第35-36页 |
| ·血清HA1特异性抗体水平的检测 | 第36页 |
| ·间接ELISA检测样品SIgA-HA1 | 第36页 |
| ·直接ELISA检测样品总SIgA | 第36页 |
| ·实验数据处理 | 第36页 |
| 4 实验结果 | 第36-48页 |
| ·PCR扩增结果 | 第36-38页 |
| ·目的基因PCR扩增结果 | 第36-37页 |
| ·融合基因ctb-ha1和ctb-linker-ha1的PCR扩增结果 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pCTC-CTB、pCTC-HA1、pCTC-CH和pCTC-CLH的构建与鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒pCSCTB、pCSHA1、pCSCH和pCSCLH的构建 | 第38-39页 |
| ·重组菌株的构建与鉴定 | 第39页 |
| ·重组菌株MICH、MICLH质粒稳定性结果 | 第39-40页 |
| ·重组菌株的血凝和血凝抑制试验结果 | 第40-42页 |
| ·重组菌株免疫商品代雏鸡试验结果 | 第42-48页 |
| ·免疫前后鸡血清中IgG-HA1检测结果 | 第42-43页 |
| ·间接ELISA检测免疫前后鸡鼻腔洗液、气管洗液和肠洗液中SIgA-HA1结果 | 第43-45页 |
| ·直接ELISA检测免疫前后鸡鼻腔洗液、气管洗液和肠洗液中总SIgA结果 | 第45-48页 |
| 5 讨论 | 第48-50页 |
| ·中间质粒PUC-CTC的构建 | 第48页 |
| ·肠道黏膜免疫与粘膜佐剂的选择 | 第48-49页 |
| ·重组菌株免疫效应 | 第49-50页 |
| 6 总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
