| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-26页 |
| ·植物脂质转移蛋白(LTP)研究进展 | 第13-16页 |
| ·LTP的理化性质 | 第13页 |
| ·植物LTP在细胞中的定位 | 第13-14页 |
| ·LTP家族的生物学功能 | 第14-15页 |
| ·LTP与信号转导 | 第14页 |
| ·LTP在角质、胚胎形成方面的功能 | 第14页 |
| ·LTP的抗性和防御功能 | 第14-15页 |
| ·AtDHyPRP1基因的研究进展 | 第15-16页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP) | 第16-18页 |
| ·GFP的理化性质 | 第16-17页 |
| ·GFP在生物学中的应用 | 第17-18页 |
| ·GFP是最重要的报告基因 | 第17页 |
| ·GFP可作为蛋白质研究的标签 | 第17-18页 |
| ·植物抗病机制 | 第18-24页 |
| ·超敏反应(Hypersensitive Response,HR) | 第18-19页 |
| ·系统获得性抗性(systemic acquired resistance,SAR) | 第19-20页 |
| ·拟南芥与丁香假单胞菌之间的互作关系 | 第20-24页 |
| ·丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae) | 第20页 |
| ·拟南芥与丁香假单胞菌互作体系 | 第20页 |
| ·拟南芥与丁香假单胞菌互作体系中的R基因和Avr基因 | 第20-22页 |
| ·拟南芥与丁香假单胞菌互作体系中的R基因 | 第20-21页 |
| ·拟南芥与丁香假单胞菌互作体系中的Avr基因 | 第21-22页 |
| ·拟南芥与丁香假单胞菌体系的互作模型 | 第22-24页 |
| ·本工作的研究目的 | 第24页 |
| ·研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 AtDHyPRP1蛋白的计算机分析 | 第26-32页 |
| ·方法 | 第26页 |
| ·生物信息学软件 | 第26页 |
| ·方法 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-30页 |
| ·AtDHyPRP1蛋白的结构特征 | 第26-27页 |
| ·AtDHyPRP1蛋白的理化性质 | 第27-29页 |
| ·AtDHyPRP1蛋白的结构分析 | 第29-30页 |
| ·AtDHyPRP1与植物LTP的氨基酸序列比对 | 第30页 |
| ·AtDHyPRP1基因的芯片数据分析 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 AtDHyPRP1敲除突变体、过表达、RNA干扰与35S::AtDHyPRP1-GFP转基因株系的筛选与鉴定 | 第32-60页 |
| ·材料与方法 | 第32-46页 |
| ·材料与试剂 | 第32页 |
| ·AtDHyPRP1过表达株系的筛选 | 第32-38页 |
| ·AtDHyPRP1基因的克隆 | 第32-37页 |
| ·AtDHyPRP1基因过表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·35S::AtDHy-PRP1-GFP融合表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·AtDHyPRP1 RNA干扰载体的构建 | 第40-42页 |
| ·反向片段的连接 | 第40-41页 |
| ·正向片段的连接 | 第41-42页 |
| ·T-DNA敲除纯合突变体的筛选 | 第42页 |
| ·BASTA筛选 | 第42页 |
| ·PCR筛选 | 第42页 |
| ·AtDHyPRP1过表达、RNAi与35S::AtDHyPRP1-GFP转基因拟南芥植株的筛选与鉴定 | 第42-46页 |
| ·农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·农杆菌感受态细胞的冻融法转化 | 第43页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第43-45页 |
| ·转基因拟南芥植株的筛选与鉴定 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-58页 |
| ·AtDHyPRP1过表达拟南芥转基因株系的筛选 | 第46-50页 |
| ·AtDHyPRP1基因的分离与过表达载体pRI101-AN-AtDHyPRP1的构建 | 第46-47页 |
| ·通过冻融法将RI101-AN-AtDHyPRP1过表达载体转化至农杆菌LBA4404 | 第47-48页 |
| ·AtDHyPRP1过表达转基因株系的筛选与鉴定 | 第48-50页 |
| ·35S::AtDHyPRP1-GFP拟南芥转基因株系的筛选 | 第50-54页 |
| ·融合表达载体pCAMBIA1302-AtDHyPRP1-GFP的构建 | 第50-51页 |
| ·通过冻融法将融合表达载体pCAMBIA1302-AtDHyPRP1-GFP转化至农杆菌LBA4404 | 第51-52页 |
| ·35S::AtDHyPRP1-GFP拟南芥转基因株系的筛选与鉴定 | 第52-54页 |
| ·AtDHyPRP1 RNAi拟南芥株系的筛选 | 第54-57页 |
| ·RNA干扰载体RNAi-AtDHyPRP1的构建 | 第54-55页 |
| ·通过冻融法将RNA干扰载体RNAi-AtDHyPRP1转化至农杆菌LBA4404 | 第55页 |
| ·AtDHyPRP1 RNAi拟南芥株系的筛选与鉴定 | 第55-57页 |
| ·T-DNA敲除纯合突变体株系的筛选 | 第57-58页 |
| ·Basta选择 | 第57页 |
| ·AtDHyPRP1在纯合突变体中的表达分析 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 AtDHyPRP1的亚细胞定位及其对灰霉菌的抗性 | 第60-76页 |
| ·材料与方法 | 第60-67页 |
| ·材料与试剂 | 第60页 |
| ·转AtDHyPRP1基因烟草植株的再生和分子鉴定 | 第60-66页 |
| ·烟草的叶圆盘法转化 | 第60页 |
| ·转基因烟草的分子鉴定 | 第60-66页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第61页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR检测 | 第61-62页 |
| ·转基因烟草的Southern印迹分析 | 第62-65页 |
| ·转基因烟草的Northern印迹分析 | 第65-66页 |
| ·蒜薹灰霉菌侵染分析 | 第66-67页 |
| ·AtDHyPRP1蛋白的亚细胞定位 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-75页 |
| ·转AtDHyPRP1基因烟草的再生 | 第67-68页 |
| ·转AtDHyPRP1基因烟草的PCR及RT-PCR检测 | 第68-69页 |
| ·转AtDHyPRP1基因烟草的PCR检测 | 第68页 |
| ·转AtDHyPRP1基因烟草的RT-PCR检测 | 第68-69页 |
| ·转AtDHyPRP1基因烟草的Southern blotting分析 | 第69页 |
| ·转AtDHyPRP1基因烟草的Northern blotting分析 | 第69-70页 |
| ·转AtDHyPRP1基因烟草对蒜薹灰霉菌的抗性分析 | 第70-71页 |
| ·台酚蓝染色 | 第71页 |
| ·DAB染色 | 第71-72页 |
| ·AtDHyPRP1蛋白的亚细胞定位 | 第72-75页 |
| ·转AtDHyPRP1-GFP拟南芥根细胞的GFP荧光观察 | 第72-73页 |
| ·转AtDHyPRP1-GFP拟南芥叶片细胞的GFP荧光观察 | 第73-74页 |
| ·转AtDHyPRP1-GFP拟南芥茎细胞的GFP荧光观察 | 第74页 |
| ·转AtDHyPRP1-GFP拟南芥根细胞中GFP荧光强度的变化 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| 第五章 AtDHyPRP1对灰霉菌和丁香假单胞菌的抗性 | 第76-86页 |
| ·材料与方法 | 第76-78页 |
| ·材料 | 第76页 |
| ·Pst DC3000和Pst avrRpt2侵染后AtDHyPRP1基因的表达分析 | 第76页 |
| ·Pst DC3000和Pst avrRpt2侵染 | 第76页 |
| ·RT-PCR分析 | 第76页 |
| ·AtDHyPRP1过表达、RNA干扰、纯合突变体和Ws野生型拟南芥对蒜薹灰霉菌的应答特征 | 第76页 |
| ·蒜薹灰霉菌的培养 | 第76页 |
| ·侵染后的表型观察 | 第76页 |
| ·AtDHyPRP1过表达、RNA干扰、纯合突变体和Ws野生型拟南芥对有毒Pst DC3000侵染的应答特征 | 第76-77页 |
| ·丁香假单胞菌的培养 | 第77页 |
| ·侵染后的表型观察 | 第77页 |
| ·细菌生长量分析 | 第77页 |
| ·系统性获得抗性(SAR)分析 | 第77-78页 |
| ·侵染后的表型观察 | 第77-78页 |
| ·细菌生长量分析 | 第78页 |
| ·Pst DC3000侵染35S::AtDHyPRP1-GFP转基因拟南芥植株后AtDHyPRP1亚细胞定位的变化 | 第78页 |
| ·Pst DC3000侵染35S::AtDHyPRP1-GFP转基因拟南芥植株后根细胞中AtDHyPRP1定位的变化 | 第78页 |
| ·Pst DC3000侵染35S::AtDHyPRP1-GFP转基因拟南芥植株后叶片细胞中AtDHyPRP1定位的变化 | 第78页 |
| ·结果 | 第78-85页 |
| ·Pst DC3000和Pst avrRpt2侵染后AtDHyPRP1基因的表达特征 | 第78-79页 |
| ·AtDHyPRP1过表达、RNA干扰、纯合突变体和Ws野生型拟南芥对蒜薹灰霉菌的应答特征 | 第79页 |
| ·AtDHyPRP1过表达、RNA干扰、纯合突变体和Ws野生型拟南芥对Pst DC3000的应答特征 | 第79-81页 |
| ·系统性获得抗性(SAR)分析 | 第81-83页 |
| ·Pst DC3000侵染35S::AtDHyPRP1-GFP转基因拟南芥植株后AtDHyPRP1亚细胞定位的变化 | 第83-85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| 结论 | 第86-88页 |
| 1 研究结论 | 第86-87页 |
| 2 本研究的特色与创新 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-99页 |
| 附录 | 第99-101页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
