中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-11页 |
前言 | 第11-14页 |
材料与方法 | 第14-44页 |
一、实验材料 | 第14-25页 |
1.工具酶及分子量Marker | 第14页 |
2.主要生化试剂 | 第14页 |
3.培养基、血清及添加剂 | 第14-15页 |
4.细胞因子 | 第15页 |
5.试剂盒 | 第15页 |
6.同位素标记化合物 | 第15页 |
7.菌株 | 第15页 |
8.质粒 | 第15-21页 |
9.细胞系 | 第21页 |
10.人脐带血标本 | 第21页 |
11.引物 | 第21-25页 |
12.生物分析软件 | 第25页 |
13.主要仪器及设备 | 第25页 |
二、实验方法 | 第25-44页 |
1.细胞学实验 | 第25-28页 |
2.造血干细胞的体外培养 | 第28-29页 |
3.Real-time PCR | 第29-31页 |
4.DDRT-PCR分析 | 第31-33页 |
5.重组质粒的构建 | 第33-35页 |
6.质粒DNA的提取 | 第35-36页 |
7.慢病毒的包装 | 第36-37页 |
8.RNase保护实验 | 第37-40页 |
9.Western blot | 第40-41页 |
10.免疫共沉淀及质谱分析 | 第41-42页 |
11.重组蛋白的表达及纯化 | 第42-44页 |
实验结果 | 第44-82页 |
1.骨髓、脐带血和HPFH患者骨髓DDRT-PCR分析 | 第44-50页 |
2.多个候选基因的克隆以及其在珠蛋白基因调控中初步功能分析 | 第50-51页 |
3.CTDSPL2基因的结构、表达及定位分析 | 第51-55页 |
4.CTDSPL2在K562细胞中的过表达对于珠蛋白基因表达的影响 | 第55-68页 |
5.CTDSPL2在K562细胞中的表达抑制对于珠蛋白基因表达的影响 | 第68-72页 |
6.CTDSPL2在造血干/祖细胞红系分化过程中对于珠蛋白基因的调控作用 | 第72-75页 |
7.CTDSPL2活化ε-及γ-珠蛋白基因的机制研究 | 第75-82页 |
讨论 | 第82-93页 |
一、人脐带血、正常成人以及HFPH患者骨髓中基因的差异表达 | 第83-85页 |
二、CTDSPL2基因在K562细胞中促进ε-及γ-珠蛋白基因表达的功能 | 第85-88页 |
三、CTDSPL2基因在CD34+细胞中促进ε-及γ-珠蛋白基因表达的功能 | 第88-90页 |
四、CTDSPL2基因调节珠蛋白基因表达的机制 | 第90-92页 |
五、展望 | 第92-93页 |
小结 | 第93-94页 |
参考文献 | 第94-100页 |
文献综述 | 第100-119页 |
攻读博士期间发表和待发表的论文和参加的学术会议 | 第119-121页 |
致谢 | 第121-122页 |
附录 | 第122-125页 |